凝固全血基因组DNA提取系统(溶液型)40311

2025-08-03

凝固血液基因组DNA提取试剂he(溶液型)

凝固全血基因组DNA提取系统(溶液型)

目录号:40311

产品内容:

自备试剂:

异丙醇、70%乙醇

保存条件:

室温(15~25℃)

产品简介:

适用于从凝固血液样本中快速提取高质量的基因组DNA。

首先细胞核裂解液配合蛋白酶K裂解凝固xue块释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA在Sigma的分子生物学级Glycogen的助沉下通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

产品特点:

1.简便快速:30min内可获得高纯度的基因组DNA。

2.安全无毒:无需苯fen/氯仿抽提。

3.高产:典型的产量1ml全血可提取出10~30µg基因组DNA。

4.高纯:OD260/280=1.7~1.9,长度可达 50~150kb,可直接进行可直接用于构建文库、PCR、、酶切、Southern-blot等分子生物学实验。

注意事项:

1.本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血,如EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬,影响裂解效果,建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。

2.为了优良效果,zui hao使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本,不要使用反复冻融超过3次的标本,否则会严重降低产量。

3.不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大,血液DNA产量的个体差异也可能非常大。

4.如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出,可在37℃水浴溶解,摇匀后使用。

5.本试剂盒为溶液型,可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量(20µl-10ml),请联系我们索取其它处理量的操作手册。

6.DNA溶解液是TE缓冲液洗脱(10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH8.0),长期保存DNA,但是EDTA可能下游酶切反应,使用时可以适当稀释。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准操作步骤:

1.加入■50μl凝固血液至一个1.5ml离心管或◆1ml凝固血液至一个50ml离心管,剧烈涡旋或者用手剧烈拍打离心管帮助打散凝xue块。

2.加入■550μl或◆11ml细胞核裂解液,吹打混匀,再加入■3μl或◆60μl蛋白酶 K(20mg/ml),颠倒混匀25次。

3.55℃放置3小时至过夜,直到所有的凝块wan全融解。

4.可选步骤(一般不需要做):加入■3μl或◆60μlRNaseA(4mg/ml),在裂解物中加入RNaseA(10mg/ml)至终浓度30μg/ml,颠倒25次混匀,37℃温育15分钟去除残留RNA。

5.将裂解物迅速冷却到室温(可置冰上一分钟)。

6.加入■200μl或◆4ml蛋白沉淀液,在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25 秒,混匀后可能见到一些小的蛋白团块。

注意:液体确实要旋转着振荡起来,而不仅仅是上下振动,这样混匀效果和沉淀蛋白效果zui jia。

7.置冰上■5分钟 或◆10分钟。

8.■13,000-16,000xg离心5分钟或◆2,500xg(可根据需要调整加大离心力)离心10分钟。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀,也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

9.小心吸取上清到一个新的■1.5ml离心管或◆50ml离心管中。

注意:吸取上清时,注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中,可再次离心2分钟后取上清。

10.加入■600μl的室温异丙醇和1μlGlycogen溶液或◆12ml室温异丙醇和 20μlGlycogen溶液,轻柔颠倒50次混匀或者直到出现棉絮状(丝状)白色 DNA沉淀。(注意:处理样品量大的时候才可能看见丝状沉淀,处理样品量少或者保存质量不好的时候往往看不见。)

11.■13,000-16,000xg离心1分钟或◆2,500xg离心 3分钟,这时候应该看到管底白色的 DNA 沉淀。

12.小心弃上清,倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇(注意不要丢失沉淀)。

13.加入■600μl或◆12ml70%乙醇,颠倒几次漂洗DNA沉淀。

14.■13,000-16,000xg离心1分钟或◆2,500xg离心1分钟, 倒去上清

(沉淀很松,注意不要把DNA沉淀倒掉了),倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇,还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇,空气晾干沉淀几分钟。

注意:不要干燥过头,否则 DNA极其难溶;也不能残留太多乙醇,否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。

15.加入■20μl或◆250-400μlTE缓冲液(或者客户根据需要选择的缓冲液)重新水化溶解DNA 沉淀,轻弹管壁混匀,可以放置在 65℃温育 30-60分钟(不要超过一小时),也可以在室温或者 4℃放置过夜来重新水化 DNA,中间不时的轻弹管壁帮助重新水化 DNA。

16.DNA可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。

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