Apllap Tsc DNA连接酶(来自高温活性栖热菌) 货号:E9015-85-4-500U Apllap

2025-08-09

Apllap Tsc DNA连接酶(来自高温活性栖热菌)

货号:E9015-85-4-500U

规格:500U

品牌: Apllap

报价:¥2640.00

商品描述

Tsc DNA连接酶(来自高温活性栖热菌)

具有热稳定性的NAD +依赖性双链DNA连接酶,在15至75°C的温度下具有活性。 描述 来自高温活性栖热菌的DNA连接酶是一种热稳定的NAD +依赖性双链DNA连接酶,在15至75°C的温度下具有活性。该酶对平端DNA片段没有活性。 产品提供500单位,以及10x反应缓冲液。 产品描述 介绍: Tsc DNA连接酶催化双链DNA结构中相邻3′-羟基和5′-磷酸末端的NAD依赖性连接。与T4 DNA连接酶相反,Tsc DNA连接酶对平末端DNA片段没有可检测的活性。与T4 DNA连接酶不同,Tsc DNA连接酶在4 bp和2 bp的内聚末端在最佳温度条件下仅表现出最小的连接活性。Tsc DNA连接酶对RNA靶没有活性。Tsc DNA连接酶是从大肠杆菌菌株中分离和纯化的,该菌株带有一个质粒,该质粒具有克隆的DNA连接酶基因,该基因来自冰岛分离的嗜热细菌水管致黑栖热菌(1,2)。 连接酶的半衰期在91°C下为26分钟(3)。该酶的反应温度范围很广,下限约为15℃,上限由DNA底物的解链温度(Tm)决定。该酶在pH范围为7-9的各种DNA聚合酶缓冲液中也有活性。在最佳条件下,与其他常见的热稳定连接酶相比,Tsc DNA连接酶的寡核苷酸连接速率和程度要高得多(4,5)。 应用范围: Tsc DNA连接酶是需要高温,高严格双链DNA连接的应用的理想酶.Tsc DNA连接酶可 用于: 用于扩增DNA靶标的连接酶链反应(LCR)(6-8)。 用于突变分析的寡核苷酸连接测定法(OLA)(9-10)。 重复扩增检测(11)仅用于研究遗传异常,例如三核苷酸重复,而不用于诊断目的(例如易碎X,亨廷顿病)。 来自重叠寡核苷酸的基因合成(12)。 存储: 储存和稀释缓冲液:20 mM Tris-HCl,50 mM KCl,0.1 mM EDTA,0.1%Triton X-100(v / v),1 mM二硫苏糖醇(DTT),50%甘油(v / v) ,pH 7.6(25°C)。 Tsc连接酶在–15°C至-25°C下保存时稳定。 反应条件: 1 x反应缓冲液(已提供10 x)20 mM Tris-HCl,20 mM KCl,10 mM MgCl2、0.1%Nonidet P40(v / v),0.5 mM NAD,1 mM DTT,pH 7.5( 25°C)。 浓度和单位定义 浓度10 U /μl。一单位Tsc DNA连接酶可在45°C下于1分钟内催化1μgBstEII消化的λDNA的cos位点的50%连接。 应用协议: 寡核苷酸连接的反应方案: 解冻下面列出的组件,然后将其放在冰上。在设置反应之前,先短暂涡旋并离心所有试剂。在置于冰上的微量离心管中设置反应成分: 成分 容量 最终浓度 反应缓冲液(10x) 2.0μl 1 x 寡核苷酸1 Xμl 1-30nM 寡核苷酸2 Xμl 1-30nM 模板DNA Xμl 0.1ng Tsc DNA连接酶 0.5μl 5U 加入无菌水 高达20.0μl 总量 20.0μl 典型的温度曲线为:94°C 2分钟,94°C 30秒,45-65°C 3分钟,并重复最后两个温度进行30个循环。 99°C 10分钟。 活性测定: 用于单位定义的酶测定法是用BstII消化的λDNA的cos位点的连接。 成分 容量 最终浓度 反应缓冲液(10x) 2.0μl 1x λDNA(已消化BstEII) Xμl 1μg Tsc DNA连接酶 稀释系列 加入无菌水 高达20.0μl 总量 20.0μl 在45°C孵育1-15分钟。在干冰/乙醇浴中停止反应。在琼脂糖凝胶上分析之前,在65°C下孵育10分钟(融解未连接的cos位点) 通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色测定结果。 质量控制: 如下所述,分析每批活性 ssDNA连接酶的活性和污染活性。 缺少DNA核酸内切酶: 在25μl反应中,将0.25μg超螺旋pBR322 DNA与递增量的Tsc DNA连接酶在37°C下孵育16小时。大于100 U的Tsc DNA连接酶显示pBR322 DNA的超螺旋结构没有松弛。 在37℃和64℃下,在25 µl反应中用Tsc DNA连接酶诱导加入0.25 µgλ-DNAEco RI / HindIII片段16 h。 100 U的Tsc DNA连接酶显示未改变条带模式。 缺少核酸外切酶: 将越来越多的Tsc DNA连接酶在50μl含有[3H]标记的DNA的测试缓冲液中于37°C和64°C孵育4小时。显示无核酸外切酶活性的酶量> 100U。 缺少核糖核酸酶: 根据制造商规程,使用了Ambion的RNaseAlertTM实验室测试套件检测RNase活性。 1小时后,在37°C孵育X U Tsc DNA连接酶后,未检测到RNase活性。

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