禽白血病病毒ELISA抗原检测试剂盒 货号:ALV-AG-96

2025-08-08

禽白血病病毒ELISA抗原检测试剂盒

货号:ALV-AG-96

品牌:金山科研平台

报价:¥2917.00

商品描述

ALV-AG-96禽白血病病毒ELISA抗原检测

试剂盒使用说明书

【介绍】

本试剂盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的检测。

本试剂盒是采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)原理来检测禽白血病病毒的P27抗原。检测时,在相应的反应孔中加入阴、阳对照品和待测样品,经温育后,若样品中含有P27抗原,则与酶标板上的抗体结合形成抗原抗

体复合物,反之则不能结合。洗涤后,加入的酶标记物与包被板上的抗原抗体复合物发生特异性结合。再次洗涤后加入底物,酶催化底物反应呈现蓝色,颜色深浅与样品中P27抗原的含量成正相关,从而达到快速检测的目的。

【组份】

酶标板1块(96孔/板)底物液B1瓶(6mL/瓶)

阴性对照(NC)1管(2mL/管)终止液1瓶(12mL/瓶)

阳性对照(PC)1管(2mL/管)25×浓缩洗涤液1瓶(30mL/瓶)

酶标记物工作液1瓶(12mL/瓶)说明书1份

底物液A1瓶(6mL/瓶)盖板膜1张

【需自备的设备及试剂】

酶标仪(650 nm)、去离子水、离心管、微量移液器、计时器、离心机(4000r/min)、棉签、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等。

【样品制备】

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

【试剂配制】

a)0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液:准确称取氯化钠 8.0 g、氯化钾 0.2 g、磷酸氢

二钠1.14 g和磷酸二氢钾0.24 g,加入去离子水溶解并定容至1 L。

b)洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25℃),并摇动,

使沉淀溶解(最好在37℃恒温培养箱中加热5~10 min),然后用蒸馏水作25 倍稀释(例如:30 mL 的浓缩洗涤液加上 720 mL 蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液2~8℃可存放7日。

【样品处理】

1.蛋清:取全蛋,破碎后,直接取蛋清100μL。

2.泄殖腔拭子:取棉签于待检鸡只泄殖腔取样,然后放入1 mL PBS溶液(0.01mol/L,pH 值 7.4)中,-20℃以下冰箱中冻融一次,待其恢复至室温后,取 100 μL 进行检测。

3.疫苗:疫苗稀释液将疫苗溶解,再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀释10-20倍后,取100μL进行检测。

4.胎粪:无需稀释,可以直接用于检测,若样品中含有沉淀或杂质,需在2000~3000 r/min,离心 10 min,取 100 μL 上清进行检测。

【注意事项】

1.本品仅供体外检测使用。

2.不同批号试剂盒中的组份不可混用。

3.勿使用过期的试剂盒,已开封的组份应在有效期内使用。

4.必须使用符合药典规定的水(如蒸馏水、去离子水或纯水)稀释洗涤液。

5.试剂盒各组份在使用前应预先平衡至室温(25±2℃)。

6.未使用的酶标板应放回铝箔袋并封口,2~8℃保存。

7.应避免使用金属类物质盛装和搅拌试剂。

8.勿将底物溶液暴露于强光下。

9.本品终止液为强酸,避免同眼、皮肤接触。

10.移液系统应保证准确清洁,应提供准确溶液体积的同时不造成交叉污染。

【操作步骤】

1.取酶标板(根据样品多少,可拆开分次使用),阴性对照、阳性对照和待检样品各取100 µL加至相应微孔中,盖好盖板膜,轻轻振荡酶标板10 s,充分混匀,室温下(25±2℃)避光反应60 min。

注:阴、阳性对照各设2孔,待检样品设1孔。

2.甩掉孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300μL,震荡洗涤4次,每次30s 左右,在干净吸水纸上拍打去除残存洗涤液。

3.每孔加入100μL酶标记物工作液,盖好盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应60 min。

4.弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同2。

5.底物A液与底物B液按1:1混合均匀,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)反应15 min。

注:底物工作液也可提前配制,但配制完后需5 min内使用。每孔加入终止液100μL,5 min内测定结果。

注:若终止液出现絮状结晶,可37℃加热,待其溶解后使用。

【结果判定】

1.在酶标仪上读各孔OD650nm值,计算出阴性对照孔OD均值NC和阳性对照孔OD均值PC。

注:NC值<0.200且0.500<PC值≤2.000,试验结果才有效。否则,应进行重复试验。

2.按照公式计算出S/P值:S/P=(SC-NC)/(PC-NC)。

注:SC为被检样品孔OD值。

3.如果S/P<0.17,说明样品中无禽白血病病毒P27蛋白;如果S/P≥0.17,说明样品中有禽白血病病毒P27蛋白。

【有效期】

2~8℃避光保存,有效期为 12 个月。

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