描述

将BD高尔基塞™（一种含有brefeldin A的蛋白质转运抑制剂）的离体添加到体外或体内刺激的淋巴细胞中，阻断其细胞内蛋白质转运过程。这导致高尔基复合物中细胞因子和/或蛋白质的积累。细胞因子在细胞中积累的增加通过免疫荧光染色和流式细胞术分析增强了产生细胞因子的细胞的可检测性。

准备和储存

未稀释储存在4°C。 推荐的检测程序

细胞刺激：已经报道了各种体外方法，用于刺激细胞产生细胞因子。多克隆激活剂对于诱导产生细胞因子的细胞特别有用。这些激活剂包括：康康那瓦林 A、脂多糖、佛尔波酯加钙离子载体或离子载体或离子霉素、植物血凝素、葡萄球菌、肠毒素 B 和针对 TCR/CD3 复合物亚基的单克隆抗体（有或没有针对共刺激受体的抗体，如 CD28）。

使用BD高尔基塞™的程序：每1ml细胞培养物（例如， 10 ^ 6个细胞/ mL）加入1μlBD高尔基塞™并 混合。用BD高尔基塞™ 刺激细胞4至6小时可显着提高通过免疫荧光染色检测产生细胞因子的细胞的能力。建议BD高尔基塞™不要在细胞培养物中保存超过12小时。

作为BD高尔基塞™的替代品，研究人员可能希望考虑使用BD GolgiStop™，一种含有monensin的蛋白质转运抑制剂（类别号554724）。已经发现BD高尔基塞™和BD高尔基阻滞™对细胞内细胞因子染色具有不同的作用，这是时间，激活剂和细胞因子依赖性的。在进行细胞内细胞因子染色时需要考虑这些因素。