高效动物组织/细胞总 RNA 提取试剂盒

FlashPure Plus Tissue/Cell Total RNA Mini Kit

高效动物组织/细胞总RNA提取试剂盒

目录号：91451

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃），有效期 12 个月。

产品简介

适用于快速提取各种动物组织、细胞的总 RNA，采用 gDNA 过滤器，高效滤除gDNA，不需要繁琐的DNase I消化过程，提取的RNA，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE、芯片等。

产品特点

1. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！

2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全过程仅需 10 min！

重要提示：

① 第一次使用前，请先在漂洗液 RW 中加入无水乙醇，详见瓶身标签。

② 所有离心步骤均需要在室温（15~25℃）下进行。

③ 肝脏、脾脏、肾脏、胰腺、心脏的样本投入量不要超过 10 mg。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

操作步骤：

1. 动物组织：

a．电动匀浆：取新鲜组织 10~25 mg，加入 500μl 裂解液 ACL Plus，电动匀浆，直到无明显组织块即可。

b．液氮研磨：在液氮中研磨组织成细粉，取 10~25 mg 组织细粉加入500μl裂解液 ACL Plus，剧烈涡旋振荡 20 sec，充分裂解。

c． 将匀浆后裂解物 13，000 rpm 离心 3 min。

d．下接步骤 3。

2. 细胞

a．悬浮细胞：离心收集细胞，加入500 μl裂解液 ACL Plus（<7x106 细胞），吹打混匀，剧烈涡旋振荡 20 sec，充分裂解。

b．贴壁细胞：吸弃细胞培养基，可以直接在培养皿中加裂解液ACL Plus进行消化、裂解；或先用胰mei消化后离心收集细胞，再加入裂解液，每<7x106细胞加入500μl裂解液ACL Plus，吹打混匀，涡旋振荡至无明显细胞团，使其充分裂解。

贴壁细胞培养数量表：

3. 将裂解物上清或者裂解物全部加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中（以下简称通用柱），13,000 rpm 离心 1 min，丢弃通用柱的内管，保留滤液（RNA 在滤液中）。

4. 向滤液中加入0.5倍体积（通常为 250 μl）的无水乙醇，吹打混匀。

5. 将滤液混合物全部加入一个通用柱中，13,000 rpm 离心1 min，倒弃

滤液。此时，RNA被吸附在膜上。

6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室温放置1min,13,000rpm 离心30sec，倒弃滤液。

7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 离心30sec，倒弃滤液。

8. 重复步骤 7。

9. 把通用柱放回收集管中，13,000rpm离心2min，che底除去膜上残留的乙醇。

10. 取出通用柱，放入新的RNase-free 1.5ml离心管中，向吸附膜的中央悬空滴加30-50μl RNase-Free H2O（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1min，13,000rpm离心1min。

11. 得到的RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

附录：

一、免液氮直接研磨（自动研磨仪）——适用于新鲜样本

a. 在2.0ml液氮研磨管中加入4mm两粒，加500μl裂解液ACL plus，放进20mg左右的样本，设置65个频率，震荡2min。

b. 将裂解物13,000 rpm 离心3min，沉淀不能裂解的碎片。

二、液氮研磨（自动研磨仪）:

a. 把研磨模块丢到液氮中预冷，直到没有气泡冒出视为预冷完毕。

b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm钢珠3粒，放进20-30mg样本，投入液氮中预冷。

c. 把预冷好的离心管插入研磨模块中，放进研磨仪，设置55个频率，震荡30~60sec。（以北京赫得研磨仪——京 N9548 为例）

d. 研磨完成后，马上加500μl裂解液ACL Plus，剧烈涡旋振荡,充分混匀。

e. 将裂解物13,000rpm离心3min，沉淀不能裂解的碎片。

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