凋亡DNA Ladder快速提取试剂盒
凋亡DNA Ladder快速提取试剂盒 核酸提取
目录号:40116
适用范围:
适用于快速提取凋亡DNA Ladder
试剂盒组成、储存、稳定性:
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1. 裂解/结合液CB低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:
细胞发生凋亡时,染色质DNA在核小体之间发生断裂,最终形成200bp整数倍的DNA片段,这些DNA片段被提取后,经电泳及溴化乙锭染色后形成梯子状外观,谓之DNA Ladder。血液和组织培养细胞在裂解/结合液中裂解后,释放出来的DNA片段在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的洗脱缓冲液将DNA Ladder片段从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1. 不需要使用有毒的苯fen等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2. 本公司du有的裂解/结合液配方有效裂解细胞,使用本试剂盒不需要加入昂贵的蛋白酶K处理,大大降低了使用成本和加快了处理速度。
3. 节省时间,简捷,单个样品操作一般可在10分钟内完成。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
3. 裂解/结合液CB含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 一般2×106培养细胞DNA产量为10-20μg, 200μl人全血典型产量为3-6μg。
5. 一般电泳检测时典型上样量为2-3μg纯化的DNA,如果凋亡率低,有可能只见到基因组DNA,而见不到DNA ladder,可以试试加大上样量。
操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指ding量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 取2×106个细胞(悬浮细胞或者组织培养细胞重悬在200μl PBS中)或者200μl全血(大约含有2×106个细胞)加入200μl 裂解/结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀。
可选做步骤: 如果RNA残留较多,影响凋亡DNA ladder的观察,可以在加入200μl裂解/结合液CB 前加20μl RNase A(25mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
细胞或者全血处理起始量最大可达300μl,如果起始量介于200μl-300μl之间,则需要按比例相应提高后面使用试剂量。
2. 室温(15℃-20℃)放置10分钟。
3. 加入100μl 异丙醇,立刻涡旋振荡充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
上述步骤中适当力度充分混匀非常重要,混匀不充分严重降低产量。如果样品粘稠不易混匀,则可以涡旋振荡15秒。
4. 将上一步混合物(包括可能有的沉淀)加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30秒,倒掉收集管中的废液。
5. 加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
6. 加入500μl漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
7. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇影响洗脱效率和下游反应。
8. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热),室温放置3-5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
9. DNA可以直接使用或者存放在-20℃,但是不要超过14天。
10. 取大约2-3μg纯化的DNA电泳检测(注意200μl人全血典型产量只有3-6μg)。
问题与解决方法:
凋亡DNA Ladder快速提取试剂盒 核酸提取
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