PfuDNAPolymerase(含超纯dNTP)PCR相关71013

2025-08-07

Pfu DNA Polymerase (含超纯 dNTP)

Pfu DNA Polymerase(含超纯dNTP)PCR相关

目录号::71013

产品内容

保存条件

-20℃保存,有效期 2 年。

经常使用,可置于 4 °C 保存,有效期 3 个月。

产品简介

Pfu DNA Polymerase 是从克隆有DNA Polymerase 基因的大肠杆菌中分离纯化的, Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性,能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率zui低的。其PCR产物为平端,可直接用平端载体克隆。

活性单位:

1 单位(U)Pfu DNA Polymerase 活性定义为在 74℃、30 分钟内,以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板引物,将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制:

SDS-PAGE 检测纯度大于 99%,经检测无外源核酸酶活性;PCR 方法 检测无宿主残余 DNA,能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。

酶贮存缓冲液:

50mM Tris-HCl(pH 8.2),0.1mM EDTA,1mM DTT,Stabilizers,50% glycerol。

10×Pfu Buffer (含Mg2+):

200 mM Tris-HCl (pH8.8),100 mM KCl,100 mM(NH4)2 SO4,20 mM MgSO4,其他成分。

适用范围:

用于DNA的高保真扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析(SNP)和平末端补平等。

注意事项:

1. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性,所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间,如果扩增片段小于4 kb,建议Pfu酶的延伸速度为1kb / min;如果扩增片段大于4 kb,建议延伸速度为0.5kb / min。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物, 所以应先加dNTP后,再加Pfu酶到反应体系中,并立即进行PCR反应。

2. 用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高,引物长度大于18个碱基,Tm在55-80℃ 之间,引物浓度在0.1-0.5 μM之间,比Taq酶略高。

3. Pfu酶的热稳定性比Taq酶好,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对Pfu酶的活性无影响。

4. 高保真PFU对于dNTP纯度要求很高,因此建议用本酶配套的超纯dNTPmix。

Pfu DNA Polymerase的使用说明:

一、配制 PCR 反应体系:(于冰上配制)

参考模板用量(50 μl 反应体系):

质粒:0.1-10 ng;细菌基因组:10-100 ng;人类基因组:50-150 ng;cDNA:1-5 μl from RT。

二、设置 PCR 循环条件:(请根据实际情况适当调整)

三、结果检测:反应结束后取 5 µl 反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。

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