2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)
2×LongHiFi PCR Master Mix(含染料)PCR相关
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产品内容
保存条件
-20℃保存,有效期 2 年。
经常使用,可置于 4 °C 保存,有效期 3 个月。
产品简介
2× LongHiFi PCR Mix为多种采用zui xian进基因工程改造而来的超保真酶添加延伸因子混合而成,极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。2× LongHiFi PCR Mix是长片段、超保真、快速扩增的shou选产品。
PCR产物为平末端,不需要加A头,可直接用Blunt平末端系列载体克隆。
本产品包含LongHiFi DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液,浓度为2×。使用时,只需加入模板、引物,并补足水至Mix终浓度为1×即可。
本制品含红色示踪染料,不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳;也可经过纯化处理,以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。
产品特点
1. 高产:一般 PCR 产物量比传统产量高 50%-100%!
2. 高效:延伸速度可以达到 3-4kb/min,是 pfu 的 6-8 倍!
3. 高成功率:对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果!
4. 超高保真:保真度是 taq 的 81 倍以上。
5. 扩增长度长:以复杂基因组 DNA 为模板扩增可达 10kb,以简单基因组、质粒和噬菌体 DNA 为模板扩增可达 15kb。
2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用说明:
一、配制 PCR 反应体系:(于冰上配制)
参考模板用量:(以 50 μl 反应体系为例)
质粒:0.1-10 ng;
细菌基因组:10-100 ng;
人类基因组:50-150 ng;
cDNA:1-5 μl from RT。
注意:实际操作中,首先要计算好需要补加 ddH2O 的量以后,建议先加水,然后按上述顺序添加其它成分,最后加 LongHiFi PCR Mix,瞬离,上机。
二、设置 PCR 循环条件:(请根据实际情况适当调整)
注意:一般情况下,Annealing Temperature = Tm - 5°C
1. 质粒和简单基因组等简单模板,可以采用 10-15 sec/kb;复杂模板 ( 如人类基因组 DNA ),可以采用 20-25 sec/kb。
2. 对于高 GC 含量的模板,预变性和变性温度可以提高到 98℃。
3. 如果电泳发现主带上下拖尾模糊现象,或者泳道出现从上样孔拖下来的涂抹带现象,一般提示延伸时间过长,梯度缩短延伸时间(建议 10-15sec/kb 为梯度减少延伸时间)直到获得满意结果。
三、结果检测:反应结束后取 5 µl 反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
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