FlashPure sgRNA Purification Kit

高效sgRNA纯化试剂盒

高效sgRNA纯化试剂盒 T7体外转录

目录号:91614

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃）

产品简介

本试剂盒是一款快速可靠的sgRNA专用的纯化试剂盒，可体外转录（IVT）酶促反应中纯化多达200 μg浓缩的高质量RNA。du特设计的微量sgRNA纯化柱，可确保零缓冲液残留，无交叉污染，洗脱体积低至6μl。

在高盐条件下，RNA与硅胶吸附膜高效、专一地结合，经过漂洗步骤，最后RNA被RNase-Free H2O洗脱下来，最大限度地去除了不需要的NTP、蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等，确保在IVT/RNA合成反应后获得高纯度的RNA转录本。洗脱后的RNA可用于多种下游应用，包括RT-PCR、NGS、RNA文库制备、Northern blot、Formation of ribonucleoprotein (RNP) complexes for genome editing、显微注射、RNA标记、RNA干扰、转染等下游实验。

本试剂盒不但可以纯化miRNA等各种小的RNA，也可以纯化大片段的mRNA等RNA。还适用于从酶反应液（如DNase处理、体外转录、RNA加帽、蛋白酶处理、RNA标记等）中纯化回收RNA，也可用于

从其它方式提取获得的RNA的纯化。

适用范围

适用于回收≥15nt的单链RNA或者双链RNA。

产品特点

1.快速：步骤少，操作简便，整个操作仅需15分钟。

2.高效：du特配方使本产品比一般试剂盒回收效率大大提高，并且不会抑制下游反应。

注意事项

1.使用前请检查Buffer MRC是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

2.所有步骤均可以在室温进行，但是应该迅速操作，减少RNA降解机会。

3.Wash Solution 1和Wash Solution 2/3加入无水乙醇后，可以在常温保存。

4.Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，不吸晶体，直接吸上清使用就可以。

操作步骤

提示：

第一次使用前请先在Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签，并打对勾标记。

1.于冰上，用RNase-Free H2O将RNA样品补足至100 μl，加入200 μl Buffer MRC，轻柔混匀。

2.加入375 μl（1.25倍体积）无水乙醇，混匀，无需离心。

注意：如果希望回收大于25nt的RNA，加1.25倍体积无水乙醇就可以；

如果希望回收大于15nt的RNA，可以加2倍体积无水乙醇。

3.将上一步所得溶液加入一套吸附柱中（吸附柱套在收集管内），13,000 rpm离心30 sec，弃滤液，将吸附柱重新套回收集管。（吸附柱的最大容量是700 ul，溶液较多时，可分两次进行）

4.加入700 μl Wash Solution 1（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm离心30 sec，弃滤液。

5.漂洗：加入500ul Wash Solution 2/3，13,000 rpm离心30 sec，弃滤液。

6.二次漂洗：重复步骤5一次。

7.干燥：将离心吸附柱于13,000 rpm离心2 min，甩干残留漂洗液。

8.洗脱：将吸附柱置于一个新的1.5 ml离心管中，在吸附膜的中央悬空滴加10 ~ 20 μl RNase-Free H2O，室温放置2 min，13,000 rpm离心1 min，收集RNA片段。

注意：为增加回收效率，可将RNase-Free H₂O在80℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集。

减少洗脱液（RNase-Free H₂O）的体积可以提高RNA浓度，但是zui低洗脱液体积不应少于6μl。

高效sgRNA纯化试剂盒 T7体外转录