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蛋白染色只要五分钟！目标蛋白可直接取出做质谱分析

VisPRO^TM蛋白负染色试剂盒为imidazole-zinc 负染色剂剂，能在5分钟内完成染色步骤，灵敏度高达 1 ng，并可相容于质谱仪分析及各种下游实验。连结：http://www.visualprotein.com/vispro/index.php/proteomics/vispro-5-minutes-protein-stain-kit一、产品特点：1. 简单且快速：染色过程只需5分钟即可或得结果，不需要醋酸固定2. 超高灵敏度：可达到 1ng 以下，优于SYPRO Ruby、银染法与CBB染色3. 高应用性：染色过后可进行蛋白质转渍或、电泳溶离、质谱仪蛋白质鉴定与转译后修饰分析4. 安全且容易操作：染液不具毒性且可室温储存二、技术原理：一般蛋白质染剂为正染色法，藉由染剂分子和蛋白质结合而达到观察蛋白质染色效果，换言之，有颜色的区域则代表是有蛋白质的存在的地方；VisPRO^TM蛋白负染色试剂盒跟正染色方式不同，为负染色法，其中溶液I 为 Imidazole 溶液，溶液II为锌离子溶液。胶体先浸泡溶液I，Imidazole 会充满在整个胶片，而蛋白质处因空间已被占据，所以 Imidazole 无法进入。随后加入溶液II，锌离子与与胶体内的 Imidazole 结合形成白色沉淀，蛋白质位置因无白色沉淀而呈现透明。图1：正染色与负染色法示意图图2：VisPRO 蛋白质负染色试剂与其他染色法操作时间比较图三、使用方法：1. 电泳完成后，将胶体小心放入黑色染盒，加入Solution I 直到胶体*被覆盖。2. 将染盒置于震荡摆动机，并使Solution I 和胶体作用 5 分钟。3. 倒掉 Solution I，加入 ddH2O 润洗胶体，移除多余液体。4. 于胶体周围加入Solution II，并以手快速且大力的摇动染盒使染剂均匀分布，20-40 秒之内将出现呈色影像 (蛋白质位置为透明，其余胶体位置为白色)。5. 当胶体染色完毕，倒掉 Solution II，使用 ddH2O 润洗胶体两次将终止反应。6. 使用 Gel Lighting Plate 可得到更好的观察效果，或是利用穿透式扫瞄机得到*的影像。图3：VisPRO 蛋白质负染色试剂操作步骤图四、实验结果图：图4：VisPRO 蛋白质负染色试剂与其他染剂的灵敏度比较，显示 VisPRO 染剂聚有较佳的染色灵敏度五、Q&A：Q1： 请问经由 VisPRO 染色后的胶体，若想将蛋白质取出进行质谱分析，后续操作步骤为何?A1： VisPRO染色后的胶体可直接取下使用，金山科研平台代理微信：jinshanbio步骤如下：(1) 用 ddH2O 清洗二维电泳胶体两次，每次 10 分钟。(2) 将 Blue tip 前端用剪刀剪下约 1 mm，接着垂直对准在二维电泳胶体待取下的点。(3) 接着按压 Blue tip 后轻轻旋转，并确定胶体块已被切下。(4) 把 Blue tip 倒插在 1.5 mL 离心管 (需可耐有机溶剂) 中，以离心管底端轻搞桌面，使胶体块掉落在离心管中。(5) 加入 1mL 10% 醋酸溶液到 eppendorf，摇晃 30 分钟达到胶体染色还原和蛋白质固定效果。后续步骤可参考各质谱设备厂商的建议步骤。Q2： 请问VisPRO染色后的胶体，可以进行蛋白质转印与后续Western blotting 实验吗?A2： 可以。VisPRO 染色后的胶体，以 Native 电泳缓冲液润洗两次，*次摇晃润洗 5 分钟，第二次摇晃润洗 10 分钟。后续步骤请参照转印设备厂商的建议步骤。Q3： 请问 VisPRO 染色后的胶体，也可以进行蛋白质溶离实验吗?A3： 可以。VisPRO 染剂不会结合蛋白质，相当适合进行蛋白质溶离实验进行蛋白质纯化。金山科研平台代理微信：jinshanbio步骤如下：(1) 使用解剖刀将含有蛋白质胶体切下，并将胶体切0.5cm X0.5cm 大小左右。(2) 将切割完成胶体放置在 eppendorf 内，加入 1mL 冰的电泳溶离液震荡 5 分钟进行退染，移除胶体内的染剂。(3) 倒掉电泳溶离液，再加入 1mL 冰的电泳溶离液震荡 5 分钟。(4) 倒掉电泳溶离液，将胶体取至电泳溶离槽，设定电流等 10mA，分别在 2 小时、4 小时、6 小时、24 小时分别收集 0.2mL 电泳溶离液即可。

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