品名： TaKaRa 2步法反转录PCR扩增试剂盒

品牌： TaKaRa

型号： RR014A 产品详情 金山科研平台现货促销

商品名称：PrimeScript RT-PCR Kit

商品编号：SPU2021050491

上架时间：2022-01-06

■ 制品内容 (Code No. RR014A ; 50 次量*1)

PrimeScript RTase (for 2 Step)25 μl5 × PrimeScript Buffer200 μlRNase Inhibitor (40 U/μl)25 μldNTP Mixture (10 mM each)150 μlOligo dT Primer (2.5 μM)50 μlRandom 6 mers (20 μM)50 μlTaKaRa Ex TaqHS (5 U/μl)25 μl10 × PCR BufferⅡ250 μlControl F-1 Primer*2(20 μM)10 μlControl R-1 Primer*3(20μM)10 μlPositive Control RNA (2 × 105copies/μl)20 μlRNase Free dH2O1 ml*1 反转录反应20μl、PCR反应50μl体系时可使用50次。*2 Positive Control RNA用上游引物。*3 Positive Control RNA用下游引物。

■ 制品说明

PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应) 是一种使用两条引物在目的DNA序列两侧扩增特异性DNA片段的过程。它是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法，但RNA不能直接被扩增。经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA后，PCR法便可应用于RNA的解析了。目前，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。PrimeScript RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能与高扩增效率的2 Step RT-PCR试剂盒。反转录反应使用了Takara Bio Inc.特别开发的M-MLV由来的新型反转录酶PrimeScript RTase；PCR反应使用了扩增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex TaqHS。本试剂盒具有以下优点：1. 进行高效的RT-PCR扩增。2. 在标准的RNA反转录反应温度 (42℃) 下，便可使具有复杂结构的RNA进行良好的延伸，可以避免RNA在高温条件下的降解。3. 能有效抑制非特异性的PCR扩增。本试剂盒含有反转录反应及PCR扩增反应所需的全部试剂。

■ 各种引物的序列

引物名称各引物序列Random 6 merspd (N)6Oligo dT PrimerTakara Bio特别设计的dT区域*Control F-1 Primer5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

* 该序列和TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. : RR019A/B) 的Oligo dT Adaptor Primer不同，不含有与M13 Primer M4匹配的序列。

■ Positive Control RNA

本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒 (质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四环素基因) 为模板由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的。

图1. Positive Control RNA：使用Control Primer可以扩增462 bp的DNA片段

■ 保存

-20℃。

■ RNA PCR 的原理

PrimeScript RT-PCR Kit首先用PrimeScript RTase将RNA合成cDNA，再取一部分1st strand cDNA作为模板，由TaKaRa Ex TaqHS进行PCR扩增。将RNA反转录成cDNA的引物可以使用Random 6 mers、Oligo dT Primer或特异性下游引物。

图2. PrimeScript RT-PCR Kit原理图

图3. PrimeScript RT-PCR Kit 的操作流程

■ 特点

RNA模板适用于所有RNA扩增片段大小～12 kb反转录酶PrimeScript RTase (反转录反应最适温度42℃)DNA PolymeraseTaKaRa Ex TaqHSRNase InhibitorKit中含有合成第一条cDNA链的引物Random 6 mers、Oligo dT Primer和特异性下游引物

■ 反转录反应时Primer的选择

反转录引物的选择，应结合实验的具体情况，选择以下三种引物，即：Random 6 mers、Oligo dT Primer或特异性下游引物。对没有发夹结构的短链mRNA，上述三种引物都可以使用；一般情况下的反转录引物的选择请参照以下说明。

Random 6 mers适用于长的或具有Hairpin构造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在内的所有RNA的反转录反应都可使用本引物。Oligo dT Primer适用于具有PolyA Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物的rRNA、tRNA以及某些种类的真核生物的mRNA等不具有PolyA Tail)。特异性下游引物(PCR时的下游引物)必须与模板序列互补，需了解Target序列。

■ 使用注意

1. 当同时需要进行数次RT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样，可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。2. 用PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、TaKaRa Ex TaqHS等酶类时，应轻轻混匀，避免起泡；分取之前要小心地离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。3. 酶制品应在实验前才从-20℃中取出，使用后也应立即放入-20℃保存。4. 为了防止Positive Control RNA分解，应尽量避免反复冻融。有条件的实验室最好保存于-70℃～-80℃。5. 分装试剂时务必使用新的枪头，以防止样品间污染。

PrimeScript™RT-PCRKit
品牌	CodeNo.	产品名称	包装量
Takara	RR014A	PrimeScript™RT-PCRKit	50次
Takara	RR014B(A×4)	PrimeScript™RT-PCRKit	200次

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