品名： TaKaRa 定点突变操作的试剂盒

品牌： TaKaRa

型号： R401 产品详情 金山科研平台现货促销

商品名称：TaKaRa MutanBEST Kit

商品编号：SPU2021050590

上架时间：2022-01-04

■ 制品内容 (20 次量)

PyrobestDNA Polymerase (5 U/μl)15 μl10×PyrobestBuffer II200 μldNTP Mixture (2.5 mM each)180 μl10×Blunting Kination Buffer50 μlBlunting Kination Enzyme Mix25 μlLigation Solution I*150 μl* Ligation Solution I即为Ligation Kit Ver.2.1 的一种组份。

■ 制品说明

本制品是利用PCR技术进行定点突变操作的试剂盒。其原理是利用导入变异点的引物进行PCR反应后，对PCR产物进行末端平滑化及5’磷酸 (P) 化处理，再用高效连接试剂Ligation Solution I进行自身连接 (环化反应)，然后转化、提取突变体DNA。本试剂盒的原理十分简单，但Taq酶在PCR过程中的错配率限制了这一技术的应用。现在，Takara的PyrobestDNA Polymerase使这一技术得到了很好的发挥。PyrobestDNA Polymerase不仅具有很高的保真性（Fidelity），并且和TaKaRa Taq具有同样的扩增效率。与其他突变试剂盒相比，本试剂盒的特点是操作方便、简单，只需一天时间便可完成整个操作，并且不受载体、宿主菌的限制。■保存-20℃。■ TaKaRa MutanBEST Kit原理试剂盒原理见下图，全套操作约需5小时，简单说明如下。1. 设计一对5’端邻接，3’端方向相反的引物用以导入变异点。2. 进行PCR扩增 (使用高保真DNA聚合酶PyrobestDNA Polymerase)。3. PCR片段的末端平滑及5’末端磷酸化反应 (在同一反应体系内进行，反应只需10分钟)。4. 自身连接反应 (使用本试剂盒中的DNA高效连接液Ligation Solution I，连接反应只需30 分钟至1小时)。5. 质粒DNA转化，挑选变异体。

■注意事项

1. 当载体与插入的DNA片段的总长度小于5 kb时，使用本试剂盒较为合适；如果载体与插入DNA 片段长度太长时，不推荐使用本试剂盒。2. PCR反应后的DNA片段应进行切胶回收纯化，然后再进行自身连接反应，这样可以提高突变成功率。3. Ligation Solution I请于冰中融解，使用前混匀。应避免多次反复冻融。4. 连接转化效率低时，请试用下述方法进行改进。① 确认感受态细胞的转化效率。② 延长连接反应时间至过夜反应。

TaKaRaMutanBESTKit
品牌	CodeNo.	产品名称	包装量
Takara	R401	TaKaRaMutanBESTKit	20次

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