品名： TaKaRa 感受态细胞 E.coli HST04 dam-/dcm-

品牌： TaKaRa

型号： 9129 产品详情 金山科研平台现货促销

■ 制品内容E.coliHST04dam-/dcm-Competent Cells100 μl × 10pUC19 plasmid (0.1 ng/μl)10 μlSOC Medium*1 ml × 10

*SOC Medium: 2%Ttryptone0.5%Yeast extract10 mMNaCl2.5 mMKCl 10 mMMgSO410 mMMgCl220 mMGlucose

■ 制品说明

Takara公司在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E. coliHST04 dam-/dcm-Competent Cells，当用1 ng pUC19转化100 μl细胞时，转化效率＞1×106cfu/μg。E.coliHST04dam-/dcm-是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，使DNA不被甲基化。使用本菌株转化所得到的质粒，可以被对dam、dcm甲基化敏感的限制酶切割。另外，dam、recA双重突变的菌株是致死的，本菌株为recA+菌株。因此，易与带有同源序列的外源DNA发生重组。本制品只适用于转化已经构筑好的质粒, 而不适用于常规的克隆转化。

■ 细胞浓度

1-2×109bacteria/ml

■ Genotype

E. coliHST04dam-/dcm-： F-,ara, △(lac-proAB) [Φ80dlacZ△M15],rpsL(str),thi, △(mrr-hsdRMS-mcrBC), △mcrA,dam,dcm

■ 保存

-80℃。注意： 如果不在-80℃下保存，转化效率将会降低。此时，在使用前，请使用附带的pUC19 对照质粒来确认细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 质量标准

转入1 ng 的pUC19 plasmid，涂于含有ampicillin的L-plate进行筛选。转化效率 : >1 x 106colonies/μg pUC19 plasmid

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度质粒DNA不要超过10 ng。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞使用体积或tube类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基，转化效率可能会降低。

·L-broth：10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl，用1 N NaOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

·φ b-broth：5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MaSO4·7H2O，用1 N KOH调整pH到7.5，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

·L-plates： 10 g Tryptone，5 g Yeast extract，5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH调整pH到7.5，添加agar到1.5%，使体系终体积为1 L，高压灭菌。

6. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。但是，如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。

E.coliHST04dam-/dcm-CompetentCells
品牌	CodeNo.	产品名称	包装量
Takara	9129	E.coliHST04dam-/dcm-CompetentCells	1Set(100μl×10支)

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