TaKaRa 伴侣感受态细胞 pG-Tf2/BL21-耗材-金山科研平台

TaKaRa 伴侣感受态细胞 pG-Tf2/BL21

2024-07-23

品名： TaKaRa 伴侣感受态细胞 pG-Tf2/BL21

品牌： TaKaRa

型号： 9124 产品详情金山科研平台现货促销金山科研平台授权一级代理，咨询微信：jinshanbio

■ 制品内容

● Chaperone Competent Cells BL21 Set (Code No.: 9120)1. Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL213 × 100 μl2. Chaperone Competent Cells pGro7/BL213 × 100 μl3. Chaperone Competent Cells pKJE7/BL213 × 100 μl4. Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL213 × 100 μl5. Chaperone Competent Cells pTf16/BL213 × 100 μl6. TaKaRa Competent Cell BL213 × 100 μl7. pUC19 DNA (0.1 ng/μl)1× 10 μl8. SOC medium*18 × 1 ml● Chaperone Competent Cells pG-KJE8/BL21 (Code No.: 9121)● Chaperone Competent Cells pGro7/BL21 (Code No.: 9122)● Chaperone Competent Cells pG-Tf2/BL21 (Code No.: 9124)● Chaperone Competent Cells pTf16/BL21 (Code No.: 9125)1. Competent Cell10 × 100 μl2. pUC19 DNA (0.1 ng/μl)1× 10 μl3. SOC medium*10 × 1 ml

*SOC medium: 2%Tryptone0.5%Yeast extract10 mMNaCl2.5 mMKCl10 mMMgSO410 mMMgCl220 mMGlucose

■ 制品说明

Chaperone Competent Cell BL21 Series是由五种分别转化一种伴侣蛋白质粒 (Chaperone Plasmid Set (Code No.: 3340)) 的Escerichia coliBL21制成的感受态细胞。众所周知，分子伴侣参与蛋白质折叠过程，且人们已经通过大量的实验研究来表明体内蛋白折叠机理。本制品中含有五种类型的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2、pTf16)，每一种质粒都是能有效表达一组协同作用、共同参与蛋白折叠的被称作“Chaperone team”的分子伴侣。靶蛋白与其中一种“Chaperone team”共同表达，便可增加可溶性蛋白质的回收比率，而用通常方法，由于包涵体的形成，这些表达蛋白质常常是不可回收的。E.coliBL21来源于B株，为Lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型。因此，表达的外源蛋白质在该体系中有更高的稳定性。当进行靶蛋白与“Chaperone team”共表达实验时，通常需要三步：1. 用伴侣蛋白质粒转化宿主E.coli； 2. 用转化体制备感受态细胞；3. 用质粒转化感受态细胞并表达靶蛋白。如果使用本产品，只需一步转化就可构建靶蛋白与“Chaperone team”的共表达体系，因为使用的E.coliBL21感受态细胞已转化有一种伴侣蛋白质粒。另外，此感受态细胞有五种质粒，不含有伴侣蛋白质粒的TaKaRa Competent BL21也可作为对照。每种E.coliBL21感受态细胞包括一种伴侣蛋白质粒，非常适合pCold DNA系列的表达。但该产品不适合于启动子为T7的蛋白质表达体系，如pET系列，因为，宿主E.coliBL21菌株不表达T7 RNA聚合酶。注意：本产品不可用于电击法转化。■ DNA序列pG-KJE8 DNA (Fasta形式的txt文件)pGRO7 DNA (Fasta形式的txt文件)pG-TF2 DNA (Fasta形式的txt文件)pKJE7 DNA (Fasta形式的txt文件)pTf16 DNA (Fasta形式的txt文件)■ 保存-80℃。注意：如果不是-80℃保存，转化效率将会降低。此时，可在使用前用附带的pUC19做转化实验，确认转化效率。不能保存在液氮中。■ 转化效率Chaperone competent cells：转化1 ng pUC19，涂于Cm+和Amp+平板上进行筛选。TaKaRa competent cell BL21：转化1 ng pUC19，涂于Amp+平板上进行筛选。转化效率≥1×106cfu/μg pUC19■ GenotypeE.coliBL21 : F-,ompT,hsdSB(rB-mB-),gal, dcm■ 注意事项1. 从-80℃中只取出实验所用的感受态细胞，然后立即放入干冰/EtOH bath。开始实验前不要取出。2. 可使用1.5 ml microtube替代FALCON tube，但可能会降低效率。3. 使用100 μl感受态细胞转化时，高纯度DNA使用量不要超过10 ng，否则转化效率会降低。4. 转化体系改变 (如感受态细胞使用量发生改变) ,或换用了其它tube等，需研讨转化条件 (如使用一般的1.5 ml tube时，请于42℃保温60秒)。5. 除SOC培养基外，L-broth及φb-broth也可使用，但转化效率会有所下降。6. 稀释时，使用SOC培养基。7. L-broth plate :成份per literTryptone10 gYeast extract5 gNaCl5 g用1N NaOH调整到pH7.5，添加agar到1.5%，高压灭菌。8. 不建议将解冻的感受态细胞再次冷冻保存。如果再次冻结不可避免，将细胞置于干冰/乙醇中迅速冷冻，置于-80℃保存。但是，转化效率可能会降低至少一个数量级。9. 本制品中含有的伴侣蛋白质粒带有来源于pACYC的复制起点和氯霉素抗性基因 (Cmr)，E.coli表达系统中可以使用常用的ColE1型、具氨苄抗性 (Ampr)筛选标记的表达载体，但不可与含有氯霉素抗性基因的表达质粒共同使用。

ChaperoneCompetentCellBL21Series
品牌	CodeNo.	产品名称	包装量
Takara	9120	ChaperoneCompetentCellsBL21Set	1Set(100μl×3×6种)
Takara	9121	ChaperoneCompetentCellpG-KJE8/BL21	1Set(100μl×10支)
Takara	9122	ChaperoneCompetentCellpGro7/BL21	1Set(100μl×10支)
Takara	9124	ChaperoneCompetentCellpG-Tf2/BL21	1Set(100μl×10支)
Takara	9125	ChaperoneCompetentCellpTf16/BL21	1Set(100μl×10支)

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