凯杰Qiagen150025微量样本全基因组扩增试剂盒REPLI-G Kits 100T/盒

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150025 凯杰Qiagen微量样本全基因组扩增试剂盒REPLI-G Kits 100T/盒，产品介绍： 产品品牌：Qiagen 产品货号：150025 产品名称：微量样本全基因组扩增试剂盒 英文名称：REPLI-G Kits 产品规格：100T/盒

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150025 凯杰Qiagen微量样本全基因组扩增试剂盒REPLI-G Kits 100T/盒，产品说明：

DNA Polymerase, Buffers, and Reagents for 100 x 50 µl whole genome amplification reactions (typical yield 10 µg per reaction)

用于 100 x 50 μl 全基因组扩增反应的 DNA 聚合酶、缓冲液和试剂（每次反应的典型产量为 10 μg）

特征

l 扩增的 DNA 可用于 NGS、微阵列和 PCR 应用

l 等温多重位移扩增 （MDA） 与校对 DNA 聚合酶

l 全基因组扩增 （WGA） 可从 10 ng DNA 中产生 7 至 40 μg 扩增的 DNA

l 超快格式，可在 1–1.5 小时内完成全基因组扩增

l 适用于 96 个样品的高通量形式，处理时间仅为 20 分钟

产品详情

由于基因组DNA数量不足而可以进行的基因组分析的数量和类型的限制可以通过对样本中所有DNA进行全局扩增（全基因组扩增）来克服。REPLI-g 试剂盒提供 DNA 聚合酶、缓冲液和试剂，用于高度均匀的全基因组扩增，序列偏差*小，可与各种起始材料一起使用，包括基因组 DNA、新鲜或干燥血液、口腔拭子、新鲜或冷冻组织和细胞。QIAGEN REPLI-g试剂盒有几种不同的尺寸和配置，使研究人员能够为其应用和实验室空间构建最佳工作流程。典型的 REPLI-g 产量范围约为 7 μg 至 40 μg 扩增 DNA，具体取决于所使用的试剂盒和工作流程。

REPLI-g Mini 和 Midi 试剂盒提供单管工作流程，具有更高的扩增 DNA 产量，而 REPLI-g UltraFast 试剂盒可在短短 60–90 分钟内实现高度均匀和准确的全基因组扩增。对于 96 孔形式的高通量处理，REPLI-g 筛选试剂盒的简化室温程序可实现简单的液体处理，仅需 20 分钟。REPLI-g 筛选试剂盒旨在使用一系列基因分型、PCR、测序或微阵列检测进行快速筛选。

Performance

各种样品的高产量，适用于多种应用

各种临床和非临床研究样品可与 REPLI-g 迷你和中型试剂盒一起使用，包括基因组 DNA、新鲜或干燥血液、新鲜或冷冻组织和细胞。每 50 μl 反应的典型 DNA 产量始终达到 10 μg（迷你试剂盒）或 40 μg（中型试剂盒），而无论模板DNA的数量如何，通常都能实现扩增DNA的均匀产量，从不同的模板浓度中获得均匀的DNA产量始终很重要，但对于高通量应用尤其重要，这需要后续的遗传分析，而无需额外测量或调整DNA浓度。

对于标准质量样品，REPLI-g 超快迷你试剂盒的平均 DNA 产量为 90 分钟内每 20 μl 反应 7–10 μg。如果时间非常有限，只需45分钟即可获得足够的产品进行下游遗传分析，阴性对照样品（无模板DNA）不会扩增，从而提供样品存在/不存在或污染DNA的可靠指标

REPLI-g 筛选试剂盒反应的典型 DNA 产量为每 40 μl 反应 8 μg。扩增的DNA可直接用于各种下游应用，包括基因分型（例如SNP、STR、缺失和插入）、终点PCR、定量实时PCR、微阵列和测序。与其他需要在冰上进行反应设置的全基因组扩增程序不同，REPLI-g 筛选试剂盒使用室温设置，处理时间仅为 20 分钟，特别适合并行处理多个样品。从不同的模板浓度中获得均匀的DNA产量对于高通量应用尤为重要，因为无需测量或调整DNA浓度即可进行后续遗传分析。平均产品长度通常大于 10 kb，范围在 2 kb 到 100 kb 之间

REPLI-g扩增DNA的平均产物长度通常超过10 kb，范围在2 kb至100 kb之间，因此可以进行复杂的限制性内切酶分析和长距离PCR等下游应用。REPLI-g扩增的DNA非常适合基因分型应用，例如使用TaqMan®引物/探针组进行SNP基因分型，测序和STR/微卫星分析。

研究人员反馈

“在过去的两年中，我们一直在多个项目中广泛使用REPLI-g超快速迷你套件。使用 REPLI-g 试剂盒进行的多次置换扩增能够以非常低的错误率和高覆盖率忠实地扩增所有 DNA 产物。我们使用该试剂盒的下游应用通常包括NGS，但也包括qPCR和微阵列。此外，我们正在努力在微流体或芯片实验室系统中实施这项技术，因为该方法不需要复杂的热循环程序。 范蓉博士，美国耶鲁大学生物医学工程助理教授。

成功用于二代测序

许多出版物已经证明了REPLI-g扩增DNA在下一代测序（NGS）应用中的成功应用，从肿*细胞的外显子组和全基因组测序到宏基因组学研究，再到单细胞分析（有关在NGS中成功使用REPLI-g的一系列最新出版物，请参阅我们的WGA资源页面).由于全基因组扩增DNA在NGS和阵列应用中的使用一直存在争议，我们检测到可能影响在这些下游应用中使用扩增DNA成功的潜在因素。我们确定输入材料的质量强烈影响下游NGS实验的成功。如果使用低质量的DNA（例如，降解的DNA）或老化的组织材料，则所得扩增的DNA可能无法给出可靠的结果（数据未显示）。然而，WGA使用REPLI-g技术对完整细胞或未降解的纯化DNA表明，NGS结果与纯化的gDNA获得的结果相当。基因组位点序列的序列覆盖率和比对比较表明WGA后垃圾DNA的水平最小化，而扩增和基因组DNA的错误率处于相似的百分比范围内。QIAseq FX 单细胞 RNA 和 QIAseq FX 单细胞 DNA 文库试剂盒利用 REPLI-g MDA 反应获得高质量的 NGS 文库，当起始处理 10 pg – 1 ng 的 RNA 或 DNA 时。

高保真全基因组扩增

REPLI-g 技术可在整个基因组中提供高度均匀的 DNA 扩增。Phi29聚合酶可以复制高达70 kb，而不会与基因组DNA模板解离。与基于 PCR 的全基因组扩增 （WGA） 技术相比，Phi29 聚合酶具有 3'→5' 核酸外切酶校对活性，并且在复制过程中保持高达 1000 倍的保真度。试剂盒中提供的核酸外切酶抗性引物可确保DNA产物的高产量，并且WGA缓冲液系统针对超长读取长度和无偏位点表示进行了优化。

REPLI-g 优于基于 PCR 的 WGA 方法

传统的基因组DNA扩增方法包括创建EBV转化细胞系的耗时过程，然后使用随机或退化寡核苷*引发的PCR进行全基因组扩增。此外，其他供应商通常使用的基于PCR的方法（例如DOP-PCR和PEP）会产生非特异性扩增伪影，并且无法wan全覆盖位点。在某些情况下，可能会产生长度小于 1 kb 的 DNA，而这些 DNA 不能用于许多下游应用。通常，由于使用了低保真酶Taq DNA聚合酶，生成的DNA具有更高的突变率，这可能导致容易出错的扩增，例如导致单碱基对突变，STR收缩和扩增。与这些缺点相反，REPLI-g在整个基因组中提供了高度均匀的扩增，在扩增过程中具有*小的基因座偏差和*小的突变率

Principle

放大原理

通常缺乏足够数量的基因组DNA进行基因组分析，从而限制了可以执行的分析。全基因组扩增（WGA）通过扩增样品中的整个基因组来克服这一限制，提供足够的数量来对同一DNA样品进行所有分析。REPLI-g技术在整个基因组中提供高度均匀的DNA扩增，并且序列偏差最小。

该方法基于多重位移扩增（MDA）技术，该技术使用等温基因组扩增和du特的合成Phi 29聚合酶，能够在不与基因组DNA模板解离的情况下复制高达100 kb.Phi 29聚合酶在存在核酸外切酶抗性引物的情况下使用，以实现DNA产物的高产量，具有3'→5'核酸外切酶校对活性，保真度比Taq聚合酶高1000倍，可在复制过程中保持高保真度。在du特、优化的 REPLI-g 缓冲液系统的支持下，Phi 29 聚合酶可轻松求解发夹环等二级结构，从而防止聚合酶在扩增过程中滑移、停止和解离。这使得能够产生高达100 kb的DNA片段，而不会出现序列偏差。

DNA的碱性变性

基因组DNA在用于酶扩增程序之前必须变性，这通常使用苛刻的方法完成，例如在高温下孵育（热孵育）或增加pH值（化学碱性孵育）。REPLI-g 试剂盒使用温和的碱性孵育，允许均匀的 DNA 变性，具有非常低的 DNA 片段化或非碱性位点的生成。这导致扩增的DNA具有非常高的完整性，并zui大化扩增片段的长度，从而使基因组位点和序列得到均匀的表示。使用REPLI-g试剂盒，在后续下游应用中可确保可靠的结果，没有假阳性或假阴性数据，这与使用热诱导变性的其他WGA技术不同，WGA技术会破坏模板DNA，导致位点偏倚和代表性不足。

Procedure

REPLI-g Mini和MIDI试剂盒使用一种简单可靠的方法，从少量分离的靶基因组DNA或直接从全血、干血卡、血沉棕黄层和组织培养细胞中实现准确的基因组扩增。加入裂解缓冲液，既裂解样品材料又使DNA变性，然后进行短时间的分钟孵育。中和后，加入预混液（包括REPLI-g迷你DNA聚合酶），等温扩增反应在30°C下进行过夜。

使用 REPLI-g 超快迷你试剂盒扩增基因组 DNA 涉及 3 个基本步骤。首先，样品（10 ng纯化的基因组DNA，0.5μl全血或300个组织培养细胞）经历温和的碱性变性，避免模板DNA的碎裂和损坏。接下来，将样品中和，最后在30°C下与REPLI-g超快DNA聚合酶一起孵育。 扩增的DNA在60分钟后即可使用，无需进一步纯化。

非常快速、简单和准确的 REPLI-g 筛选方法能够对多个基因组样本进行平行扩增，如 REPLI-g 筛选手册中所述。裂解样品材料，并通过在1°C下与缓冲液SB65孵育使DNA变性。 通过冷却至室温来停止变性。加入缓冲液SB2和DNA聚合酶，等温扩增进行至少10小时或在30°C下过夜。

整个反应设置在室温下进行，因此易于与液体处理仪器一起使用。96 个样品的反应设置仅需 20 分钟，节省了专注于其他重要任务的时间。REPLI-g筛选试剂盒结合了许多功能，使其非常适合用于手动或自动高通量突变筛选，包括用于提高准确性的大容量移液步骤，与96孔微孔板兼容，以及简化的方案，以实现快速简便的设置。

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Applications

l REPLI-g扩增的基因组可用于各种下游应用，包括：

l 使用 TaqMan® 引物/探针组进行 SNP 基因分型

l 基于 qPCR 和 PCR 的突变检测

l 二代测序

l 可疑交易报告/微卫星分析

l 桑格测序

l RFLP 和 Southern 印迹分析

l 阵列技术，如比较基因组杂交

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