Bradford蛋白浓度测定试剂盒
组成 | 包装(2500微孔) | 保存 |
5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
PBS稀释液 | 30ml | 2-8℃ |
蛋白标准(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
本试剂盒自订购之日起九个月内有效。本试剂盒用于酶标板或者200ul比色皿时可做2500孔。当使用2ml比色皿时可做250孔,如果是1ml比色皿时可做500孔。
产品简介:
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的zui大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明:
一,微孔酶标仪法
1.*溶解蛋白标准品,取10ml,加240ulPBS稀释至250ml,使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2.5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取1ml5×G250染色液,加入4ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3.将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
4.将样品作适当稀释(多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3-5分钟。
6.用酶标仪测定A595,或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7.根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
二,分光光度计法
如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下:
1,取八支(或者更多)干净的10ml离心管,标记上号。
2,取100ulBSA,加PBS2.4ml稀释至终浓度为0.2mg/ml。
3,5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀,取10ml5×G250染色液,加入40ml双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4,按下表加入试剂(以每孔5ml计,多余的用来润洗比色皿)
离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7(样品管1) | 8(样品管2) | 9(样品管3) |
标准蛋白BSA | 0 | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul适当稀释的样品1 | 500ul适当稀释的样品2 | …… |
PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0 | 0 | 0 | 0 |
1×G250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
5,反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。如下表。
离心管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
加染色液(分钟) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
测OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |
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