碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)

产品简介：

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需zui适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解，释放出磷酸不萘酚，后者与偶联重氮盐生成有产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。

产品组成：

自备材料：

1、载玻片、湿盒

2、显微镜

操作步骤(仅供参考)：

(一)、涂片或切片

1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定)，水洗。

2、滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育15～20min，水洗。

3、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3～5min。

4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。

(二)贴壁培养细胞

1、取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净。

2、加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。

3、滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中，避光孵育15～20min，PBS清洗。

4、入核固红染色液或甲基绿染色液复染3～5min。

5、PBS 清洗、镜检。

染色结果：

血液、骨髓涂片结果判断：

一般以积分报告结果，根据 100 个中性粒细胞阳性颗粒进行 0～4+计分。

临床意义：

1、类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。

2、急性细菌感染积分明显增高，病毒感染积分多正常或减低。

3、再生障碍性贫血积分常增高，PNH、MDS积分常减低。

注意事项：

1、血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2、培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

3、ALP孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

4、复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。

5、每次染色时，应有阳性对照片。

有效期：6个月有效。