DNA提取是Qiagen试剂盒的一大经典应用,之前的文章中我们有介绍过Qiagen试剂盒提取总RNA的操作过程,本文介绍下Qiagen试剂盒用于提取DNA的准备工作。
Qiagen试剂盒适用于使用微型离心机或真空处理从全血、血浆、血清、血沉、淋巴细胞以及体液样品中提取总(基因、线粒体和病毒)DNA。该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全血样本,样品量可达200μl。整套基因组的操作时间约为20–40分钟,一般可从200μl健康全血中获得4–12 μg DNA,洗脱体积可在50–200μl范围。
Qiagen试剂盒的抽提原理:
样品中的DNA可以特异性结合到QIAamp的硅胶膜上,通过两次洗涤可以将PCR抑制剂,如:二价阳离子和蛋白*去除,zui后结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液进行洗脱收集。
Qiagen试剂盒提取DNA开始前的准备工作:
1. 将样品平衡到室温(15-25℃);
2. 将水浴或是金属浴加热到56℃,以备第4步使用;
3. 将Buffer AE或蒸馏水平衡到室温,用于第11步的洗脱;
4. 确保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋白酶已经按照说明配置完毕;
5. 如果在Buffer AL中出现沉淀物,请在56℃孵育使其溶解。
开始前的注意事项:
1. 所以的离心步骤需要在室温(15-25℃)进行;
2. 如果样品中含有的基因组当量少于10000,请添加载体DNA(carrier DNA);
3. 200μl全血样品可以得到约3-12μgDNA。
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