TaKaRa SPP System™冷休克表达载体 I-耗材-金山科研平台

TaKaRa SPP System™冷休克表达载体 I

2024-07-22

品名： TaKaRa SPP System™冷休克表达载体 I

品牌： TaKaRa

型号： 3367 产品详情金山科研平台现货促销

■ 制品内容
SPP System Set (Code No.: 3366)
1. SPP System SetpCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNApCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA	各20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl)	0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl)	0.2 μg

SPP System I～IV (Code No.: 3367～3370)
1. pCold I～IV (SP-4) DNA中一个(0.5 μg/μl)	20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl)	0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl)	0.2 μg


■ GenBank登录
Accession No.pCold I (SP-4) DNAAB248600pCold II (SP-4) DNAAB248601pCold III (SP-4) DNAAB248602pCold IV (SP-4) DNAAB248603■ 链长pCold I (SP-4) DNA4,407 bppCold II (SP-4) DNA4,392 bppCold III (SP-4) DNA4,377 bppCold IV (SP-4) DNA4,359 bp

■ 制品说明
根据美国新泽西州医学与牙科大学的井上正顺博士小组的研究，大肠杆菌的蛋白质MazF是一种能够识别并切断单链RNA特定序列 (ACA) 的核酸内切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白质表达，只表达目的蛋白质。利用这一技术，开发了Single Protein Production (SPP) System。在SPP System中，在保持氨基酸序列不变的情况下用非ACA序列置换目的基因中的ACA序列，然后与MazF基因共表达。大部分宿主蛋白的mRNA因为有ACA序列而被MazF分解，表达被抑制，但是目的基因的转录mRNA中不含有ACA序列，不能被MazF切断，从而使目的蛋白得到高效表达。由于目的蛋白质的不同，也有比单纯使用冷休克表达载体进行表达时表达量低的情况。构建SPP系统，首先需要通过化学合成或点突变的方法制备无ACA序列的目的基因。设计无ACA基因的时候，在确保氨基酸序列不变的情况下将ACA序列替换，同时加入必须的酶切位点。其次，将无ACA基因克隆至含有无ACA转录区域的pCold (SP-4) 载体中。至此，用于目的片段的SPP系统表达的载体准备完毕，将其与能够表达足量的MazF的pMazF载体共转化至E.coli中，形成了目的片段的SPP。SPP System用的冷休克表达载体与pCold冷休克表达载体一样，根据TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位点序列有无，分成4个载体，分别是pCold I～IV (SP-4) DNA，pCold IV (SP-4)在多克隆位点的上游没有附加的序列。■ 保存-20℃。■ 特长同位素标记方便：标记的目的蛋白质最大可达到宿主胞内新生蛋白质的90%。使用宿主广泛：CspA启动子来源于大肠杆菌，所以大部分的大肠杆菌都可作为宿主使用。因为共表达用载体pMazF DNA的筛选标记是氯霉素，所以具有氯霉素抗性的大肠杆菌 (例如：Rosseta等)不能作为宿主使用。■ 纯度用于pCold (SP-4) DNA系列载体。1. 用双脱氧测序法确认多克隆位点。2. 确认多克隆位点上的限制酶NdeI,SacI,KpnI,XhoI,BamH I,EcoR I,Hind III,SalI,PstI 和XbaI只有一个酶切位点。

■ SPP System 原理图


■ SPP System冷休克表达载体图谱
TEE序列His tag序列Factor Xa切断序列pCold I (SP-4) DNA○○○pCold Ⅱ (SP-4) DNA○○×pCold Ⅲ (SP-4) DNA○××pCold Ⅳ (SP-4) DNA×××




■ MazF表达质粒pMazF DNA载体图谱

SPPSystem^™Set
品牌	CodeNo.	产品名称	包装量
Takara	3366	SPPSystem^™Set	1Set
Takara	3367	SPPSystem^™I	1Set
Takara	3368	SPPSystem^™II	1Set
Takara	3369	SPPSystem^™III	1Set
Takara	3370	SPPSystem^™IV	1Set

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