应遵守的基本预防措施

脱水培养基容易受潮，必须存放在阴凉干燥的地方，远离明亮的光线。 这些培养基实验室内使用。

仔细阅读标签上给出的说明。请注意成分、使用方法和用途。另请注意效期和批号。使用前确保培养基没有变质（物理性质上）。

培养基在下列条件下有结块的趋向：

（i）储存期间的湿度高

（ii）容器开放时间过长

（iii）每次使用后容器未密封

（iv）培养基储存太久，以至于在效期后使用（不推荐）

脱水培养基的复溶

对于复溶，使用干净、未损坏的玻璃器皿和蒸馏水或符合各国药典纯净水规格的去离子水。将规定量的培养基放在干净干燥的烧瓶中，其烧瓶体积应比制备好的培养基体积大2-3倍。添加“部分规定体积”的蒸馏水，并漩涡溶解。现在从容器一侧，逐渐添加其余量的水。在此阶段，大多数肉汤培养基都澄清可溶。为了完全溶解，可使用明火，加热板或沸水浴加热，注意避免过度加热或烧焦培养基。

微波炉也可用于煮沸，使完全溶解培养基。在微波炉中培养基初沸后，将其取出并轻轻搅拌。将培养基返回烤箱再次短时加热，直到琼脂颗粒完全溶解（总加热时间约2-3分钟）。

调pH值

用蒸馏水（或去离子水或纯净水）复溶的脱水培养基，其pH值即应为标签上规定25°C时的pH值。如果培养基存放过久，建议在使用前检查pH值并在必要时进行校正。

对于液体培养基和复溶的固体（粉末/颗粒）培养基，其pH的测量和校正应在25°C下进行。对于熔融状态的固体（粉末/颗粒）培养基，应在40°C下验证其pH值。对于液体培养基，pH的测量应在培养基灭菌并冷却至25°C时进行。应在无菌条件下取一份液体培养基，以用于测pH。对于固体（粉末/颗粒）培养基，应在固体培养基冷却至40℃时，在无菌条件下，取一份培养基用于测pH。温度旋钮应调至40℃。对固体培养基pH值的测量，也可在灭菌后25℃下，使用表面电极进行检测，正如各国药典所规定的。应检查pH值是否符合规定值。pH值校正可通过加入1N或0.1N盐酸或氢氧化钠溶液。对于从复溶培养基中取出的已知体积的样品（例如50~100ml），通过加入的酸或碱的量，可在计算后，得出最终在剩余的制备好的培养基中所需加入酸或碱的量。

灭菌

湿热灭菌

加压蒸汽形式的湿热被认为是破坏一切生命形式（包括细菌孢子）的最可靠的方法。高压灭菌器用于消毒细菌培养基，玻璃器皿和金属制品。

准备好要消毒的溶解的培养基，并按照标签上的方法消毒。通常是在121℃下灭菌15分钟，在高压蒸汽灭菌器内进行。有些培养基要求灭菌温度为115°C或118°C，这取决于分别对应于l0磅或12磅压力的培养基的成分，温度-压力的关联性列于表-1中。

应不时地确定高压灭菌的效率。高压灭菌器内的温度并不均匀。这可将2瓶含2％葡萄糖和2％磷酸氢二钠溶液放置在高压灭菌器内的不同地方的来检测。

热使溶液变成棕色。蒸汽入口附近的瓶子会另一个远离入口的瓶子棕色更深。强烈建议用户严格要求按照标签上的说明进行操作。

当加入具有热不稳定性的增菌成分或增补剂时，应在培养基灭菌冷却后添加。培养基应冷却至室温，琼脂培养基按标签是冷却至45-50℃，这时再无菌添加。一些含胆盐的培养基，如XLD（木糖赖氨酸脱氧胆酸盐）琼脂（M031/GM031），Hektoen Enteric琼脂（M467/GM467），紫红胆汁琼脂（M049/GM049）不应高压灭菌。加热培养基至沸点（100°C，30分钟）就足够了。重要的是按标签说明操作。

灭菌检查

建议定期检查所有高压灭菌器以确保其工作正常和高效。应测量温度和压力读数。蒸汽质量必须检查，包括蒸汽阀和安全阀。灭菌器内放培养基的每一处都应达到理想温度。不要使高压灭菌器超载，应使蒸汽在灭菌器内围绕内容物自由流动。培养基灭菌时，用无吸附性的棉塞或盖子来塞试管或烧瓶，盖子拧松。在一些情况下，必须使用生物指标剂，以证明高压灭菌器的灭菌能力。化学指示剂用于证实温度达到或超过的情况。和有些指示剂能指示特定温度保持的时间。

分次灭菌

在开发出高压灭菌器之前，液体和其他物品灭菌是通过在100℃下暴露于自由流动的蒸汽中完成，连续3天，每次30分钟。该方法称为分次灭菌。因为每天都完成一部分。随着高技术设备的开发和新的化学品出现，分次灭菌已经在现代微生物学中重新获得了重要性。

沸水浴

湿热通过使蛋白质变性来杀死微生物。浸入沸水中是几种湿热方法中的**种。

含有琼脂、明胶或任何其他凝胶剂的培养基必须加热，以完全溶解培养基。然而不能单纯依靠沸腾来灭菌。

巴氏杀菌

它与灭菌不同。其目的是减少液体如牛奶中的细菌，并破坏可能引起变质和人类疾病的有机体。巴氏灭菌不会影响孢子。

过滤灭菌

虽然加热能有效控制微生物，但并不能到处使用。随着19世纪最后10年人们对病毒的兴趣在增长，过滤器逐渐在微生物学得到显著的应用。过滤器是去除溶液中微生物的机械装置。过滤除菌可在真空下进行。当液体通过滤器时，有机体被拦在了滤膜微孔上。有几种类型的滤器可用，例如无机滤器、有机滤器。薄膜滤器是第三种类型，得到广泛接受。在培养基制备中，薄膜滤器被广泛使用的孔径为0.22μ和0.45μ。

空气也可过滤除去微生物。常用的是HEPA滤网。它可以去除99％以上的颗粒，包括直径＞0.3微米的微生物。

干热灭菌

干热灭菌时间在160℃下为120分钟。它适用于玻璃器皿、属器具等材料，它们能承受更高的温度。

直接火焰

最快速的灭菌方法是使用直接火焰进行灼烧。可用本生灯的火焰，对细菌接种环加热几秒钟进行消毒。这常在取样前和接种后进行。

HiLoop电动消毒器

也可以使用接种环电动消毒器（LA832）进行灼烧。建议最多接触10-15秒。

γ照射

伽马照射需要长时间照射消毒。伽玛射线是由放射性同位素钴60产生的。支原体的风险总是潜伏在原料中。此外，支原体可通过0.2μm过滤器和在不产生pH变化或培养基浑浊的情况下达到高滴度，使其成为一种无形的威胁。在这种情况下，提供质量保证的谨慎的一步是提供伽玛辐照过的材料。γ辐射不会影响产品性能，却能使污染清除。这已通过一些比较研究而证实。

化学消毒

化学因子可有效地用于控制微生物的生长，即使它们没有实现完全灭菌。大多数消毒剂具有一些毒性作用，因此必须遵循安全规范。设备和实验室都可以通过熏蒸甲醛气体或紫外线照射来排除污染。