伯乐数字PCR详细文档

2023-05-02

"遗传与变异"是生生不息生物界永恒的主题。其中遗传是基础,变异导致个体差异,也是整个生物种群进化的动力与源泉。就人类而言,随着人类基因组计划的完成与二代测序技术的普及,对整个基因组序列的了解已不是难题。但探知群体基因组水平上的变异仍是困难重重。遗传标记从最早期的RFLP(RestrictionFragment Length Polymorphis,限制性内切酶片段长度多态性)、STR(ShortTandemRepeat,短串联重复序列),直到SNP(SingleNucleotide Polymorphism,单核苷酸多态性)和CNV(CopyNumberVariations,拷贝数变异)都致力于解开"变异"水平上的谜团,因为这些变异和发育、疾病、进化等等都息息相关。

 

拥有二十多年PCR产品研发、生产经验的伯乐公司,多年来一直致力于为全球的生命科学研究人员提供富有创造力、高品质的研究设备。Bio-Rad于2011年10月正式收购了美国QuantaLife公司,在此基础上正式推出"第三代PCR"--QX200微滴式数字PCR系统(QX200TMDroplet DigitalTM PCR)。

 

微滴式数字PCR采用一种全新的方式进行核酸分子的定量,与传统PCR、定量PCR相比,其结果的精确度、准确性和灵敏度更佳。定量的结果不再依赖于Ct值,直接给出靶序列的起始浓度,实现真正意义上的绝对定量。QX200微滴发生器(dropletgenerator)将含有核酸分子的反应体系形成成千上万个纳升级的微滴,其中每个微滴或不含待检核酸靶分子,或者含有一个至数个待检核酸靶分子,且每个微滴都作为一个独立的PCR反应器。经PCR扩增后,采用微滴分析仪(dropletreader)逐个对每个微滴进行检测,有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0(因此该技术被称为"数字PCR"),最终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例,分析软件可计算给出待检靶分子的浓度或拷贝数。

 

由于能够确定待检靶分子的绝对数目,因此QX200微滴式数字PCR特别适合如下应用:拷贝数变异、突变检测和基因相对表达研究等,并对遗传病、癌症、传染病的研究提供了一种全新的技术思路与手段。


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