产品英文名称：Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2

产品中文名称：碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 产品特性

整个标记过程仅需3个小时

整个标记过程在1支过滤管中进行

酶标抗体回收率高

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 产品描述

该试剂盒主要用于制备酶免疫分析 (EIA) 所需的碱性磷酸酶标IgG以及竞争性EIA所需的碱性磷酸酶标抗原。该试剂盒中的NH2-reactive ALP能够与含有NH2的蛋白质或者其他分子反应。该试剂盒包含了标记过程中所需的全部试剂，包括储存用缓冲液。NH2-reactive ALP不需任何活化就可以和靶分子结合。因此，当碱性磷酸酶标IgG用于EIA时，NH2-reactive ALP的高效性足以使它在标记后省去纯化的过程。即使在标记后需要有一个高纯度的精制过程，也只要用亲和柱或凝胶渗透柱就能简单达到目的。在标记小分子的时候，使用试剂盒中包含的过滤管即可除去分子量较大的分子。

*ALP：Alkaline Phosphatase (碱性磷酸酶)

备注：经过同仁化学研究所的长期稳定性考验，代码为LK12的产品在0-5℃未开封的条件下由原来可以保存半年延长至一年。

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 试剂盒内容

NH2-reactive ALP...................100 µg × 3管

Reaction buffer.....................200 µl × 1管

Filtration tube........................3支

Washing buffer...........4 ml × 1瓶

Storage buffer.............4 ml × 1瓶

标记IgG操作步骤

（1）将100 μl Washing buffer以及含有50-200 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000 g离心10分钟后，加入100 μl Washing buffer再离心一次。b）

（3）将10 μl Reaction buffer加入到NH2-reactive ALP中并用移液器吹打使其溶解。

（4）将含有NH2-reactive ALP的溶液转移到IgG所集中的过滤管的滤膜上。

（5）用移液器吸取溶液吹洗净整个滤膜表面，然后将过滤管放入培养箱中，37℃培养2小时。

（6）加入190 μl Storage buffer 并吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5ml的试管中，并储 存于0-5℃下。d）

a）推荐的IgG的量为100 μg，样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于0.5 mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到50-200 μg。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记后共轭物的浓度为0.5-1.3 mg/ml。在进行后续的酶免疫，免疫印迹，免疫转染试验前先要将标记后的IgG稀释至适当的浓度。每个IgG分子上会被标记上1到3个碱性磷酸酶分子。没有被结合的碱性磷酸酶不会干扰正常的免疫试验。如果一定要纯化的话，可以使用凝胶渗透柱或亲合柱。

d）通常，碱性磷酸酶标记后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能够保存2个月，如果需要保存更久，可以在-20℃下存放。但还要注意样品自身是否稳定。

标记小分子操作步骤：

（1）用Reaction buffer制备50 μl，1 mM的氨基化合物，a）并将该溶液加入到NH2-reactive ALP管中。吹打数次使其充分混合，然后置于37℃下培养1小时。

（2）将100 μl Washing buffer加入到反应液中并将整个溶液全部移入过滤管中。

（4）加入200 μl Storage buffer并用移液器吹打10到15次来回收标记产物。c）将溶液转移至0.5 ml的试管中，并储存于0-5℃下。d）

a）如果氨基化合物在水溶液中无法溶解，可以用DMSO使其溶解，制备成10 mM的溶液，取5 μl与45 μl Reaction buffer混合。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）标记产物的浓度大约为400-500 μg/ml（10-12.5 μM）。1-2个靶分子能够和1个碱性磷酸酶分子结合。

d）标记后的小分子在0-5℃下能够存放至少6个月。

Alkaline Phosphatase Labeling Kit-NH2 注意事项

所需标记的较大的蛋白质的分子量要>50,000。

所需标记的较小的氨基化合物的分子量要<5,000。

标记过程中，标记前后的IgG总是在过滤管的滤膜上。

如果IgG溶液含有其它分子量超过10,000的蛋白质，如BSA或凝胶，在使用该试剂盒标记前请先纯

化IgG溶液。IgG溶液能够使用IgG纯化试剂盒来纯化 (不包含于此试剂盒中)。

如果IgG溶液中含有小的不溶物，离心后提取上清液来标记。

如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的酶NH2-reactive ALP放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持酶的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。