产品英文名称：Biotin Labeling Kit-NH2

产品中文名称：生物素标记试剂盒- NH2

Biotin Labeling Kit-NH2 产品特性

整个标记过程仅需1个小时

整个标记过程在1支过滤管中进行

荧光标记抗体回收率高

适用于50-200 μg的IgG

Biotin Labeling Kit-NH2 产品描述

该试剂盒主要用于制备生物素标记的蛋白质，用于酶免疫分析（EIA）。NH2-reactive biotin是试剂盒的成分之一，它含有琥珀酰亚胺基（NHS），能与蛋白质或者其它分子的氨基反应。该试剂盒中包含了标记所需的全部试剂，标记过程十分简便。只需将NH2-reactive biotin加入到IgG溶液中，37℃培养10分钟即可。每个IgG分子平均能够和5-8个生物素分子结合。过量的生物素分子能够使用过滤管将其除去。

Biotin Labeling Kit-NH2 试剂盒内容

- NH2-Reactive Biotin .......................... 3 tubes

- WS Buffer ......................................... 4 ml x 1

- Reaction Buffer ................................. 500 μl x 1

- Filtration Tube .................................. 3 tubes

标记IgG操作步骤

（1）将100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000 g离心10分钟。b）

（3）将10 μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c）

（4）将100 μl Reaction buffer以及8 μl NH2-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100 μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000 g离心10分钟，b）除去滤液。

（7）将200 μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000 g离心10分钟，b）重复该步骤一次。

（8）将200 μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5 ml试管中，在0-5℃下保存。

a）样品溶液的体积不应超过100 μl。如果抗体浓度低于1 mg/ml，重复步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100 μg。如果聚积过程中滤液的体积超过400 μl，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b）如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5分钟或者适当增加转速。

c）NH2-reactive biotin在管子的底部，向管底加入10 μl DMSO，吹打数次使其溶解。

d）如果IgG的量为200 μg，在步骤4时加入所有的NH2-reactive biotin溶液。

e）并不一定要使用WS buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

Biotin Labeling Kit-NH2 注意事项

用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

在标记过程中，IgG或者biotin-IgG标记物始终在Filtration tube的滤膜上。

如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits（不包含于本试剂盒中）来纯化。

如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

如果长时间不使用，建议您把试剂盒中的标记试剂NH2-reactive biotin放在-20℃冰箱中保存，不需要充氮气，可以更好地保持标记试剂的活性，但请不要把其它试剂和过滤管放到-20℃冰箱中，仍请放在0-5℃冰箱中保存。