产品英文名称：DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting

产品中文名称：DNA损伤定量试剂盒-AP位点计数

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 产品特性

测定基因组DNA样品中无碱基位点的数目

比色微板法检测

检测范围：1-40个abasic sites / 1×105个碱基对的DNA

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 概述

DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧 (ROS) 尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基，产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点 (AP位点) 。事实上，AP位点是由ROS产生的损伤的主要类型。醛反应性探针 (ARP； -氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。用过量ARP试剂反应后，DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法，用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。DNA损伤定量试剂盒包含用于检测每1×105个碱基对中1-40个AP位点的所有必需溶液。

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 试剂盒内容

ARP solution.................................250 μl × 1管

ARP-DNA standard solution.........不同浓度各250 μl

Filtration tube................................20管

Washing buffer.............................1包

96孔板..........................................1块

DNA binding solution..........10 ml × 1瓶

Substrate solution...............10 ml × 1瓶

TE buffer.............................40 ml × 1瓶

HRP-streptavidin................ 25 μl × 1管

DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting 注意事项

1.请将试剂盒在0-5℃保存，不要冷冻。Washing buffer Solution在室温保存。

2.AP-DNA不稳定，从样品中分离出基因组DNA后请用ARP处理并用过滤管纯化。纯化的ARP-DNA在0-5℃可以保存1年。

3.纯化ARP-DNA后应立即加入200 μl TE buffer，如果旋转震荡后的DNA放在过滤管中超过30分钟，DNA的回收率会下降。 在混合DNA Solution和DNA Binding Solution时，使用γ射线消毒的过滤管会造成DNA粘附在过滤管上，

4.如果一定要使用过滤管，请不要使用γ射线消毒的过滤管。

5.如果想精确测定样品DNA的AP位点数量，建议重复多次测定。

6.如果样品DNA Solution少于10 μl，请用等量的ARP Solution，在用过滤管纯化后要测定DNA的浓度。

7.在测定时如果没有630-670 nm的滤波片，可以从每孔中吸取50 μl溶液到一个新的96孔板中，每孔加入50 μl 1 M浓度的硫酸（sulfuric acid），在450 nm波长处检测。

8.剩余的溶液会带来误差，在每一步可以采用在纸巾上充分拍打96孔板的方式去除剩余的溶液。