等电聚焦电泳方法

一.仪器设备：

电泳仪，电泳槽，注射器，烧杯，量筒，试管，漏斗，滤纸，刻刀，移液器。

二.试剂配制：

1.电极缓冲液：

正极缓冲液：1mol/LH3PO4,11.5ml85%磷酸加水至100ml。

负极缓冲液：1mol/LNaOH,4g氢氧化钠加水至100ml。

2.品提取液：

40%制糖：40g蔗糖加水至100ml。

3.顺丁烯二酸缓冲液：

3.08gNaOH+5.8g顺丁烯二酸加水至1000ml。

4.1%a-奈酯：

1g醋酸-a-奈酯+100ml正丁酯。

5.7%冰醋酸：

70ml冰醋酸加水至1000ml。

6.固蓝RR盐+顺丁烯二酸缓冲液

三.电泳操作技术

1.样品处理：

1）浸泡：先将所需种子浸泡一段时间，以备取胚使用。

2）取胚：用刻刀把种子的胚取出，放入1.5ml离心管管内。

3）研磨：在离心管内加入120ul提取液，将胚研成匀浆，放入冰箱保存。

2.凝胶制备：

1）配制凝胶前，应把玻璃板准备好，即将两块干净的玻璃板叠放在一起，之间夹上所需凝胶厚度的胶条进行四边密封，一端留有小口来灌胶，然后用文具夹将玻璃板四周固定好。注意夹子作用力点在胶条正中，以防漏胶。

2）配制凝胶时，先将所需储备液自冰箱中取出放置温室。

3）将各种储备液按一定比例混合（见表）然后加入1ml左右的7号试剂，搅拌均匀，zui后用注射器吸净混合液，排除气泡，缓缓注入玻璃板的夹隙内。

4）将注入混合液的玻璃板静置放好，隔夜使用。

载体两性电解质

别名：两性电解质载体：Ampholyte　solution　Ampholine性状；近无色至浅黄色透明液体，有粘性，为一中相对分子质量　300-1000的人工合成的多氨基多羧酸系列两性化合物的复杂混合物。

溶度：为40％的溶液 用途：用于生物大分子蛋白质和酶的等电聚焦电泳 储存：充氮密封4度干燥保存，SCRC　680007-680021