细胞的冻存和复苏
一、细胞冻存液原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞zui易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。
二、细胞冻存液操作步骤
（一）冻存1、消化细胞（同实验二），将细胞悬液收集至离心管中。2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。3、沉淀加，轻轻吹打均匀，计数，调整至5×106/ml左右。4、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。7、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。注意：操作时应小心，以免液氮冻伤。液氮定期检查，随时补充，不能挥发干净，一般30立升的液氮能用1～1.5月。
（二）复苏1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯37℃的温水。2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。3、打开冻存管，将细胞悬液吸到离心管中。4、1000rpm离心10分钟，弃去上清液。5、沉淀加10ml培养液，吹打均匀，再离心10分钟，弃上清液。6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37℃培养，第二天观察生长情况。
三、试剂和器材器材：液氮罐、冻存管（塑料螺口冻存管或安瓿瓶）、离心管、吸管、离心机等试剂：0.25％胰酶、培养基、含保护剂的培养基（即冻存液）
C0050 品牌SGGGO QQ：1749072012 100ml 360.00
此主要是由血清和DMSO组成，适合于大多数细胞的冻存，其冻存方法与常规方法相同。
C0170 | 10×PBS，PH7.2-7.4，10倍浓缩液，液体 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0260 | 1M Hepes溶液（细胞培养） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 236.00 |
C0140 | D-Hanks（HBSS）不含钙镁，不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0130 | D-Hanks（HBSS）不含钙镁，含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0100 | D-PBS（DPBS） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 80.00 |
C0120 | Hanks（HBSS）含钙镁，不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0110 | Hanks（HBSS）含钙镁，含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 100.00 |
C0190 | L-谷氨酰氨溶液（L-Glutamine，Liquid）（200mM） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 80.00 |
C0160 | PBS缓冲液（液体）PH7.2-7.4 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 500ml | 80.00 |
C0200 | 丙酮酸钠溶液（Sodium Pyruvate）100mM | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 100.00 |
C0250 | 非必需氨基酸溶液（100×） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 140.00 |
C0240 | 青链霉素混合液（100×） | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 80.00 |
C0050 | | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 100ml | 360.00 |
C0210 | 胰蛋白酶－EDTA消化液（0.25%）不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 90.00 |
P0220 | 胰蛋白酶－EDTA消化液（0.25%）含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 90.00 |
C0230 | 胰蛋白酶消化液（0.25%）不含酚红 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 125ml | 90.00 |
N0080 | 2×HEPES缓冲盐溶液 | 品牌SGGGO QQ：1749072012 | 100ml | 100.00 |
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