明胶-琼脂糖凝胶4FF：分离试剂，层析介质。

明胶-琼脂糖凝胶 4FF 是采用溴化氰法将明胶耦合到琼脂糖凝胶 4FF 基质上的一种亲和层析填 料。明胶是一种高分子糖蛋白，在多种细胞的表面和许多细胞外液（包括血浆）中都发现了明胶的 存在，它可以特异性的结合纤维连接蛋白。明胶琼脂糖凝胶 4FF 是专为纯化或除去纤维连接蛋白的 一种亲和层析填料。

1 技术指标

2 使用方法

2.1 准备凝胶

（1）让凝胶和所有的试剂达到工作时的温度。

（2）配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

（3）明胶琼脂糖凝胶 4FF 是保存在 20%的乙醇溶液中，取适量凝胶，清洗掉 20%的乙醇，抽 干。用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1 的比例）配成匀浆。

2.2 装柱

（1）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端 无气泡。

（2）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口， 使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（3）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定。用 2~3 倍柱体 积的缓冲液平衡柱子。

2.3 平衡 让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和 pH 不变。

2.4 上样 （1）样品用平衡液配制，常用磷酸盐缓冲液或 Tris-HCl 缓冲液，浑浊的样品要离心和过滤后 上样。

（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标 产品。

2.4 洗脱 明胶-琼脂糖凝胶 4FF 可以采用不同的方式洗脱纤维连接蛋白：

（1）使用含有溴盐的缓冲液，例如溴化钠或溴化钾，并在低于平衡缓冲液 pH 值的条件下洗脱。 一种推荐的洗脱缓冲液是：0.05 M 的醋酸钠，pH 值 5.0，含 1.0 M 的溴化钠或溴化钾。

（2）可以在平衡缓冲液中加入 8 M 的脲，来洗脱吸附在凝胶上的纤维连接蛋白。

（3）纤维连接蛋白还可以通过在平衡缓冲液中添加精氨酸来进行洗脱。

2.6 再生 根据样品的性质，明胶琼脂糖凝胶 4FF 可以再生，以达到重复使用的目的。可以采用 2-3 柱体 积的高 pH 值（0.1 M 的 Tris - HCl，0.5 M NaCl，pH 值 8.5）的缓冲液和低 pH 值（0.1 M NaAC，0.5 M NaCl，pH 值 4.5）的缓冲液交替清洗凝胶。一个周期重复 3 次，然后用 3-5 倍柱体积的平衡缓冲 液平衡，即可进行下次试验。如果在纯化过程中使用了洗涤剂或变性剂（如 8 M 尿素），那么这些 洗涤剂也可以用于洗脱缓冲液中。 2.7 清洗 在一些应用中，像变性的蛋白质或脂类这样的样品，在再生过程没有被洗脱下来，可以通过加 入一些洗涤剂，例如：0.1％的 Triton X-100 ，在 37°C 的条件下洗一会。立即用至少 5 倍柱体积的 结合缓冲重新平衡。 2.8 储存 明胶-琼脂糖凝胶 4FF 应储存在 4-8℃，20%的乙醇溶液中。 特别注意： 上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。