Qiagen凯杰试剂盒205410/205411/205413

用于快速的cDNA合成和高度可重复性的两步法RT-PCR

gDNA Removal Mix可消除gDNA带来的误差

内质控可指示cDNA合成的质量

高亲和性逆转录酶可实现宽线性范围的cDNA合成

*的QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了含有基因组DNA去除方案和内质控的一种快速便捷的cDNA合成方法。gDNA Removal Mix可有效去除RNA样本中的基因组DNA污染，同时内质控RNA可以监测逆转录和扩增反应是否成功。QuantiNova Reverse Transcription Kit提供了快速高效逆转录反应所需的一切。合成的cDNA适用于进行real-time PCR, 可以对任何mRNA区域的靶向序列进行可靠定量。

Performance

*的gDNA Removal Mix可迅速有效去除RNA样本中的基因组DNA污染。去除基因组DNA污染对于获得精确基因表达结果非常关键，并且在不能设计出RNA特异性的引物时，例如当分析单外显子基因时，也需要去除基因组DNA污染。使用gDNA Removal Buffer可以节省时间和成本，因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。 全新开发的内质控是一种成分明确的转录本（RNA分子），可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA，可直接反应仪器或相应试剂是否正常，实验构建的体系是否存在错误，以及反应体系中是否存在抑制剂。预期的C_q (C_T)范围可以用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否，以及实验结果的可重复性。 QuantiNova Reverse Transcriptase的高RNA亲和性确保您可从任何RNA模板获得高产率cDNA。即便是难扩增模板，如高GC含量或含有复杂二级结构的模板，也可被成功进行逆转录反应。Reverse Transcription Mix包含一种特别优化的oligo-dT和随机引物混合物，可以从包括5’区域在内的RNA转录本的任何位置进行cDNA合成。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置，该试剂盒均能提供可供real-time PCR分析使用的高产量cDNA。同时对于低表达丰度的基因, 该试剂盒还可提供更高灵敏度的检测能力。 QuantiNova Reverse Transcription Kit可在较宽的起始量范围内提供精确的结果，在标准的实验方案中起始RNA量可zui高达5 µg，在特殊要求的实验条件下该用量可以加倍。

Principle

QuantiNova Reverse Transcriptase具有高RNA亲和性，可以在极宽的模板量范围内（10 pg– 5 μg）合成cDNA（见图：5 µg–10 pg起始 RNA的精确定量）。无论扩增靶标位于转录本的哪个位置，该试剂盒可提供用于real-time PCR分析的高产量cDNA。即使难扩增模板，比如高GC含量或含有复杂二级结构的模板，也可被成功进行逆转录反应。QuantiNova RT Buffer经过优化，可兼容real-time PCR缓冲液。为获得精确的real-time RT-PCR基因表达检测结果，非常重要的一点是保证只有cDNA被扩增和检测到。gDNA Removal Mix可迅速有效的去除基因组DNA干扰(见图：有效去除gDNA污染保证准确定量转录本）。使用gDNA Removal Mix节省了时间和成本，因为不需要在反应中或反应后单独进行DNase消化。同时，也无需设计RNA特异性引物或探针。检测cDNA合成的差异度可以显示实验结果的可重复性。全新开发的内质控是一种成分明确的转录本（RNA分子），可直接加入您的样本并同时被逆转录为cDNA，可直接反应仪器或相应试剂是否正常，实验构建的体系是否存在错误，以及反应体系中是否存在抑制剂。因为内质控和真实转录本的性质相似，所以它可以在接下来的qPCR实验中用来确认逆转录和PCR扩增的成功与否（见图：内质控可靠检测是否存在抑制剂）。

Procedure

使用QuantiNova Reverse Transcription Kit进行基因组DNA去除和cDNA合成仅需20分钟。该试剂盒包含进行快速cDNA合成的所需的一切成分。纯化后的RNA和gDNA Removal Mix简单孵育即可除去基因组DNA污染。和其它方法不同的是，RNA样本接下来可直接与Reverse Transcription Mix和Reverse Transcription Enzyme的预混液混合，进行逆转录反应。使用QuantiNova Reverse Transcriptase，逆转录反应可以在低温下进行，包括对于复杂的二级结构模板。反应在42°C的温度条件下进行保证了RNA的完整性，并随后在85°C进行酶灭活以终止反应。不需要进行额外的RNA变性或RNase H降解。

Applications

QuantiNova Reverse Transcription Kit可从任何起始材料（包括激光微切割样本或组织活检样本）获得高效及高灵敏度real-time RT-PCR结果。