Qiagen 202602/202605 HotStar HiFidelity Polymerase Kit

用于高灵敏度，高保真热启动PCR

高灵敏度、高特异性

*的UA/TA克隆

保真性比Taq DNA Polymerase高10倍

可在室温下构建反应体系，酶活化速度快

经优化的即用型试剂盒包括高保真PCR所需的所有试剂、酶、缓冲液和dNTPs。HotStar HiFidelity DNA Polymerase是一种经特异修饰的产生A突出末端的热启动校对酶，能够直接、高效的进行UA/TA克隆。缓冲液中包含Factor SB，可在PCR体系建立时防止引物和模板的降解，提供高特异性和高保真PCR。此外，Q-Solution能够有效扩增难扩增的模板（如富含GC的模板）。

Performance

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含一种经特异修饰的热启动校对酶，可在PCR体系建立时防止引物和模板的降解，提供高保真PCR，无需优化。通过检测，HotStar HiFidelity DNA Polymerase Kit可确保高特异性和高灵敏度扩增（参见"Highly sensitive and reliable PCR"）。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性比Taq DNA polymerase高10倍。新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含专有的Factor SB，提高PCR的灵敏度和可靠性，尤其在起始模板量较少的条件下。该试剂盒同时提供Q-Solution，可进一步优化PCR（参见"Amplification of difficult templates"）。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase特性

浓度：2.5 units/μl 5'–>3'外切酶活性：否 3'–>5'外切酶活性：是 额外添加A（末端转移酶活性）：是半衰期：95°C条件下>4小时 核酸酶污染：否 蛋白酶污染：否 RNase污染：否

Qiagen 202602/202605 HotStar HiFidelity Polymerase Kit

Principle

通常利用高保真酶3'→5'核酸外切酶的活性去除错配的整合碱基。但是，该活性会在PCR体系建立和起始时降解引物，而导致非特异性启动、扩增，甚至扩增产物失败，尤其在模板量较少的条件下。

HotStar HiFidelity DNA Polymerase

HotStar HighFidelity DNA Polymerase是从新型Pyrococcus spp.中特异分离的，经过化学修饰使聚合酶和核酸外切酶失活。5分钟热启动激活酶组分，使PCR起始阶段就有高校对能力。*的修饰确保体系建立过程中引物和酶的完整性，防止错误启动。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的可靠性能确保高特异性和高灵敏度的扩增。

HotStar HiFidelity PCR Buffer

新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含*的PCR添加剂，以及浓度已经优化的dNTPs和MgSO4。Factor SB是一种**的PCR添加剂，提高PCR的灵敏度和可靠性（参见"Highly sensitive and reliable PCR"）。新型的Factor SB可确保模板DNA的完整性，该DNA常常会被具有3'→5'核酸外切酶活性的高保真酶降解。

预优化试剂能够可靠的扩增特异性PCR产物，且出错率低。该缓冲液通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见"Increased specificity of primer annealing"）。*的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡组合，使得HotStar HiFidelity PCR Buffer与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg²⁺浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化。

HotStar HiFidelity PCR Buffer也含有浓度经特定优化的dNTPs，用于方便的建立PCR反应体系和获得可靠的结果。该缓冲液zui大程du上增加了HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性，确保低出错率。HotStar HiFidelity Polymerase Kit灵敏度高、特异性强以及使用HotStar HiFidelity PCR Buffer而无需优化的特性使其适合多种高保真PCR应用。

Q-Solution

HotStar HiFidelity Polymerase Kit同时提供Q-Solution，一种新型的PCR添加剂，通过更改DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种*的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR，如过多的二级结构和富含GC的模板（参见"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加剂，Q-Solution的浓度是确定的，没有毒性，并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。

完整的试剂盒规格

HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含PCR所需的所有组分。无需额外购买其他试剂或缓冲液。

Procedure

HotStar HiFidelity操作流程高效，只需按照试剂盒中已优化的试验方案操作即可。HotStar HiFidelity DNA Polymerase经过化学修饰，可以暂时性的使聚合酶和3'–>5'核酸外切酶失活。这种抑制作用可使引物和模板在PCR体系建立和循环起始阶段过度降解。95°C条件下孵育5分钟即可激活聚合酶和校对活性，可以整合入已有的热循环程序。这种修饰确保可在室温下方便的建立反应体系，而不会影响PCR的特异性和产量。

TA/UA克隆

与其他高保真DNA聚合酶相比，使用HotStar HiFidelity DNA Polymerase获得的PCR产物可直接用于TA-或UA-克隆（参见"Efficient TA/UA cloning"）。

产物的长度和灵敏度

鉴于HotStar HiFidelity Polymerase Kit的高灵敏度，即使使用极微量的起始原料也可扩增片段（如1 ng的人基因组DNA）。使用基因组DNA获得的产物长度可达5 kb，而λDNA获得的产物长度可达10 kb，表明HotStar HiFidelity Polymerase Kit适合多种应用，包括用于克隆的长片段DNA的扩增。

Applications

HotStar HiFidelity Polymerase Kit适合多种要求高灵敏度和低出错率的热启动PCR应用，如克隆和定点突变。