凯杰Qiagen12381无内*素宏量质粒提取试剂盒EndoFree Plasmid Mega Kit 5T

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12381 凯杰Qiagen无内*素宏量质粒提取试剂盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，产品介绍： 产品品牌：Qiagen 产品货号：12381 产品名称：无内*素宏量质粒提取试剂盒 英文名称：EndoFree Plasmid Mega Kit 产品规格：5T

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12381 凯杰Qiagen无内*素宏量质粒提取试剂盒5T EndoFree Plasmid Mega Kit ，产品说明：

特征

达到小于 0.1 EU/μg DNA

综合内*素去除

高拷贝质粒 DNA 的高产量

LyseBlue 可实现*佳裂解和*大 DNA 产量

产品详情

无内切质粒试剂盒提供基于阴离子交换的快速无内毒素质粒 DNA 纯化。QIA过滤器滤芯可通过过滤快速清除裂解物。纯化的DNA纯度超过2 x CsCl梯度离心获得的纯度，适用于高级转染级应用。EndoFree质粒缓冲液组合可用于制备10 mega或5 giga转染级质粒或cosmid DNA制剂。

Performance

EndoFree质粒试剂盒将高效的内毒素去除步骤集成到质粒纯化程序中——无需额外的提取或亲和柱来去除脂多糖。细菌裂解物通过QIAfilterMega-Giga或Maxi滤芯过滤进行清除，质粒DNA在含有阴离子交换树脂的重力流QIAGEN尖duan上纯化。从培养物中纯化 DNA 可获得高达 10 mg （giga）、2.5 mg（兆）和 500 μg（*大）的纯化 DNA（培养体积取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌株和培养基）。纯化的DNA不含内*素（<0.1 EU/μg DNA）。

对于低拷贝质粒和cosmid的纯化，由于所需的培养体积大且QIAfilter超千兆质粒试剂盒的容量有限，因此EndoFree质粒Mega试剂盒是比EndoFree Giga质粒试剂盒更好的选择。

无内切质粒试剂盒可去除裂解步骤中释放的细菌内*素，并影响DNA转染到原代细胞和敏感培养细胞中。从EndoFree质粒试剂盒获得的无内*素DNA非常适合在转染中获得可重复且可靠的结果。QIAGEN超纯无内*素DNA也适用于基因治疗研究和其他敏感应用。

质粒制剂中的内*素水平*

EndoFree DNA可提高原代细胞的转染效率*

*原代兔胃壁细胞转染用按所示方法制备的pEGFP-N2（CLONTECH）。使用Effectene转染试剂进行转染。数据表示表达GFP的细胞百分比，通过对转染后48小时的绿色荧光细胞数量进行评分来确定。每种纯化方法的转染效率代表来自6种以上不同DNA制备的9至2个重复培养皿的平均效率。（数据由美国佐治亚州奥古斯塔佐治亚医学院分子医学和遗传学系 C. Chew 和 J. Parente 提供。

Principle

纯化质粒DNA中的内毒素污染水平取决于所使用的纯化方法。二氧化*浆液纯化的DNA表现出ji高的内*素水平。QIAGEN、QIAfilter和HiSpeed质粒试剂盒以及2x CsCl超速离心可产生非常纯的DNA，内*素水平相对较低。EndoFree 质粒试剂盒包括一个集成的内*素去除步骤，可产生含有 <0.1 EU/μg 质粒 DNA 的质粒 DNA。

QIAfilter试剂盒以QIAfilter、HiSpeed和EndoFree质粒试剂盒形式提供，是特殊的过滤装置，旨在取代细*细胞碱性裂解后的离心。QIAfilter滤芯可wan全去除SDS沉淀物并清除细*裂解物，所需时间仅为离心所需时间的一小部分，从而将质粒纯化时间缩短多达1小时。QIAfilter超级千兆滤芯在室内真空下运行，以*小的努力有效地清除大量细菌裂解物（请注意，瓶子不包括在套件中）。QIAfilter Maxi 滤芯具有注射器形式，通过将液体推入过滤器，可在几秒钟内清除裂解物。

QIAGEN-tips中du特的阴离子交换树脂专为核酸纯化而开发。其zhuo越的分离特性使DNA纯度等于或优于连续两轮CsCl梯度离心获得的DNA纯度。预包装的QIAGEN吸头通过重力流运行，永bu干涸，*大限度地减少了质粒制备所需的手动操作时间。整个QIAGEN质粒纯化系统避免使用ben酚、氯仿、溴化乙锭和氯化铯等有*物质，*大限度地减少对用户和环境的危害。

内*素，也称为脂多糖或LPS，是大肠杆菌等革兰氏阴性细菌的细胞膜成分。内*素在质粒纯化的裂解步骤中释放，并显着降低内*素敏感细胞系的转染效率。此外，内毒素可以通过与DNA竞争“游离"转染试剂来影响转染实验中质粒DNA的摄取。内毒素还会诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞中免疫应答的非特异性激活，从而导致对转染结果的误解。这些反应包括诱导蛋白质和脂质的合成，如IL-1和前列腺素。总体而言，内*素是转染实验设置中不可控的变量，会影响结果和结果的可重复性，使其难以比较和解释。在基因治疗研究中，内毒素可以通过引起内毒性休克综合征和补体级联反应的激活来干扰。

Procedure

细菌细胞在碱性条件下裂解，并使用QIAfilter滤芯清除粗裂解物。在此阶段，将内*素去除缓冲液添加到过滤后的裂解物中，在冰上孵育。然后将澄清的裂解物加载到阴离子交换尖duan，质粒DNA在适当的低盐和pH条件下选择性结合。通过中盐洗涤除去RNA、蛋白质、代谢物和其他低分子量杂质，并在高盐缓冲液中洗脱超纯质粒DNA。DNA通过异丙醇沉淀浓缩和脱盐，并通过离心收集。

Applications

使用无内切质粒试剂盒纯化的DNA适用于任何敏感应用，包括：

l 转染，包括原代细胞、敏感细胞和悬浮细胞

l 基因治疗研究

l 基因沉默

l 注射

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